抗原的暴露主要采用酶消化或用表面活性剂的方法，酶的种类很多，其最佳pH值、离子浓度等对抗原的暴露均可产生不同的影响。另外，何种抗原的检测需何种酶也有一定特异性。
目前最常用的酶有胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶、链霉蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶及尿素酶等，另外还有西瓜蛋白酶、苹果蛋白酶和香蕉蛋白酶。其中胰蛋白酶、蛋白酶K和无花果蛋白酶消化最强烈，其次是菠萝蛋白酶、胃蛋白酶及链霉蛋白酶。各种消化酶的具体配制和使用情况如下。
(一)消化酶的配制
1．胰蛋白酶
胰蛋白酶较常用，也较易控制，主要用于细胞内抗原的检测。使用的工作浓度一般为0．05％，-0。1％。
配制方法：称取0．05g或0．1g胰蛋白酶和0．05g或0．1g无水氯化钙，加入到100ml蒸馏水中，待溶解后用0．1mol／LNaOH调pH值至7．6。
消化条件：37~C，10～40min，对某些陈旧的组织可适当延长消化时间。
注意事项：该酶的最佳pH为7．6左右，在37~C、钙离子激活的条件下活性最佳，必须新鲜配制。
2．蛋白酶K
该酶不仅可用于IHC的抗原暴露，而且常用于TUNEL末端检测和原位杂交(1SH)
前的蛋白和DNA的分离。该酶的一般工作浓度是20／／g／ml。
配制方法：TE缓冲液(0．1mol／LTris—HCl，0．05mol／L EDTA，pH8．0)，1ml：
100t~g／ml蛋白酶K，20ra。
消化条件：37~C，消化20min左右。
注意事项：蛋白酶K(proteinaseK)是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯白色念珠菌(Trititrachiumalbumlimber)类霉菌中纯化得到。该酶有2个Caz+结合位点，它
们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80％左右。因此，蛋白酶K的消化作用通常需加入EDTA。
3．胃蛋白酶
常用工作浓度为o．4％。
配制方法：0．01mol／L HCl，100ml；胃蛋白酶(Sigma公司产品)，400mg。
消化条件：37*0，30～180min。
主要用于细胞间质抗原的显示，另外还可以用于ISH前的消化。配制该酶还可以用0．1％柠檬酸。
4．链霉蛋白酶
链霉蛋白酶是从链球菌(streptomycesgriseas)中分离获得的一种丝氨酸蛋白酶和酸性蛋白酶的混合物。贮存液浓度20mg／m1，一20~C保存。最佳反应缓冲液为0．01mol／LTris—HCl(pH7．8)，0．01mol／LEDTA和0．5％SDS。常用工作浓度lmg／m1，工作温度37℃。
5．无花果蛋白酶
其工作浓度基本和胰蛋白酶类似，溶在PBS(pH7．4)中即可用于消化，消化条件为37~C，30～60min。
(二)消化酶的选择
在选择用何种酶消化时，应针对要显示的抗原成分不同而选用不同的酶。一般胃蛋白酶和菠萝蛋白酶消化主要用于细胞间质抗原的检测，例如纤连蛋白(fibronectin)、层黏连蛋白(1aminin，LN)和各型胶原的显示；其余酶消化均可用于细胞内抗原的检测。在配制蛋白酶时，应考虑到酶的最佳pH。例如胰蛋白酶的最佳pH为7．6，要在钙离子的激活下于37℃才能达到最佳效率；而胃蛋白酶则在酸性pH值下才能达到最佳效率。另外，经酶消化后的切片应充分洗涤，以去除残留的消化酶，否则会对抗体或组织进行缓慢消化，影响抗原抗体的结合，破坏组织结构。阳性和阴性对照片应同时消化，避免人为差异。
