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亲和素与生物素系统的基本原理
 
    1979年,Guesdon及其同事首先将生物素—亲和素应用于免疫组化技术中,并成功地建立了标记亲和素—生物素技术(LAB)和桥亲和素—生物素技术(BAB)。1981年,Hsu在LAB法和BAB法的基础上,先后建立了生物素—亲和素间接法及ABC法。近年来,由于双重免疫组化标记技术的发展,除ABC-HRP试剂外,还制成了ABC-AKP和ABC-GOD试剂,进而发展了ABC-AKP等技术。同时人们又对ABC法进行改进,相继出现了快速ABC法、二步ABC法、PAP和ABC连用等技术。随着链霉亲和素(streptavidin)的应用又出现了LSAB、S-P、SABC等方法。
 
 
    1.标记亲和素—生物素法(1abeledavidinbiotin,LAB)
    将亲和素与标记酶(HRP)结合,一个亲和素可结合多个HRP;将生物素与抗体(一抗或二抗)结合,一个抗体分子可连接多个生物素分子,抗体的活性不受影响。细胞的抗原(或通过一抗)先与生物素化的抗体结合,继而将酶标记亲和素结合在抗体的生物素上,如此多层放大提高了检测抗原的敏感性。
 
    2.桥接亲和素—生物素法(bridgedavidinbiotin,BAB)
    先使抗原与生物素化的抗体结合,再以游离亲和素为“桥”物素连接,也可达到多层放大效果。将生物素化抗体与酶标记生
 
    3.亲和素—生物素—过氧化物酶复合物法(avidin-biotin-peroxidasecomplex,ABC)
    此方法为前两种方法的改进,即先按一定比例将亲和素与酶标生物素(或称生物素化酶)结合,形成亲和素—生物素—过氧化物酶复合物(ABC复合物)。抗原先后与特异性一抗、生物素化二抗、ABC复合物(此ABC复合物不能饱和,即亲和素上的4个结合位点最多允许3个位点与生物素化酶结合,留1~2个位点与生物素化二抗结合)结合,最终形成巨大复合体。因该复合体网络了大量酶分子,从而提高了检测的灵敏度。
【技术支持】ABC法亲和素与生物素系统的操作流程 【技术支持】酶标仪的显示故障排除与维护
【技术支持】CSA标记方法在免疫荧光组化中的应用 【技术支持】酶标仪的组成与结构
【技术支持】CSA法的双倍放大和连续放大 【技术支持】酶标仪频繁校正波长故障的排除与维护
【技术支持】CSA法和改进CSA法的敏感性和存在的问题 【技术支持】酶联免疫测定(ELISA)标准化的一般原则
【技术支持】CSA方法在荧光原位杂交中的应用 【技术支持】酶联免疫测定(ELISA)标准化中存在的问题
落款