SABC法亲和素与生物素系统的操作流程
 
    SABC法或称S-P法、LSAB法,它是采用生物素标记的第二抗体与结合有HRP或AKP酶的链霉亲和素(streptavidin)连接来测定细胞及组织中的抗原。链霉亲和素是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质,相对分子质量60000,不含糖链,等电点p/为6.0~6.5。链霉亲和素同一定浓度的生物素化酶混合后,就能形成链霉亲和素—酶复合物,这种复合物中至少存在1个尚未被生物素占据的亲和素结合位点,可以和各种生物素标记抗体结合。由于采用了改良的亲和纯化技术和酶标技术,LSAB法敏感性更高、背景更清晰。
 
   
 
    (1) 石蜡切片常规脱蜡至水,PBS洗3X3min。
    (2)IHC的前处理视特异性一抗不同,可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复(AR),PBS洗3X3min。
    (3)3%过氧化氢孵育10min(可省略),以阻断内源性过氧化物酶活性。
    (4)PBS洗3X3min。
    (5)lo%非免疫性动物血清孵育10min(可省略),以减少非特异性背景,无需冲洗,只需吸去多余血清。
    (6)滴加适当稀释的第一抗体,37~C孵育60min或4℃过夜。
    (7)PBS洗3X3min。
    (8)滴加生物素标记的二抗,37~C孵育30~60min。
    (9)PBS洗3X3rain。
    (10)滴加过氧化物酶标记的链霉亲和素,室温孵育30min。
    (11)PBS洗3X3rain。
    (12)0.04%DAB(含0.03%H202)显色5~10rain。
    (13)复染,脱水,常规树胶封固,结果观察。
 
    此方法与ABC法相比,不需A、B两液提前混合,操作者容易掌握,稳定性高,由于采用了低等电点的链霉亲和素,其内源性生物素干扰要低于ABC法。目前该法仍将是诊断和研究的常用方法,有现成的即用型S-P试剂盒出售。种类很多,还有针对一抗是羊、鸡、大鼠、小鼠和兔的试剂盒。该法生物素化二抗和链霉亲和素—HRP(AKP)的孵育(室温)时间仅需10~15min,其敏感性和所用时间与EnVision法一致。其最大的缺点是内源性生物素的干扰。
【技术支持】ABC法亲和素与生物素系统的操作流程 【技术支持】酶标仪的显示故障排除与维护
【技术支持】CSA标记方法在免疫荧光组化中的应用 【技术支持】酶标仪的组成与结构
【技术支持】CSA法的双倍放大和连续放大 【技术支持】酶标仪频繁校正波长故障的排除与维护
【技术支持】CSA法和改进CSA法的敏感性和存在的问题 【技术支持】酶联免疫测定(ELISA)标准化的一般原则
【技术支持】CSA方法在荧光原位杂交中的应用 【技术支持】酶联免疫测定(ELISA)标准化中存在的问题