核抗原有三个组成部分:组蛋白、DNA、可溶性核抗原,后者因可溶于磷酸盐缓冲液(或生理盐水)中,故名可提取核抗原(extractable nuclear antigen,ENA)。从分子水平识别ENA多肽抗体是20世纪80年代抗核抗体研究的重大进展,现已发现这类抗体有十余种,抗ENA抗体为其总称。
 
    检测
ENA抗体过去多用琼脂双向扩散、对流免疫电泳,近年来也建立ELISA法。现已从免疫扩散法发展到与分子生物学有关的免疫印迹技术(1BT),且国内已有抗ENA多肽抗体谱检测试剂盒出售。IBT与对流电泳和双扩法相比,更敏感特异,且操作简单快速,不需特殊设备,整个检测时间一个半小时即可完成,能在各级医院应用,从而将风湿性疾病的诊断和鉴别诊断提高到分子水平。
 
    1,ENA多肽抗体谱检测原理  通过对抗原抽提及酶联免疫检测技术的改进,将抗原中的蛋白质分子按分子量大小分离后转移至硝酸纤维素膜上,通过与抗体反应,观察与特异性抗体反应的多肽的分子量和数量,不仅可以用来检测自身抗体,还可用于抗原分子的组成及抗原表位的研究。试剂盒中已将具有7种不同抗原性的ENA,如Sm、ulRNP、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70和Rib等印迹在硝酸纤维素膜上,可通过IBT一次检测这7种自身抗体。
 
    2.试剂  试剂盒内有浓缩洗涤液、酶标抗体、显色剂A、显色剂B、终止液、印迹薄膜。
 
    3.操作步骤
    (1)将浓缩洗涤液用蒸馏水按说明书进行稀释,然后每槽各加lmL,同时每槽加待测血清lOpL,充分混匀,置37℃孵育30rain。
    (2)取出反应槽,弃去槽中液体,用吸水纸吸干,加入已预温37%的洗涤液,摇动洗涤4次,每次每槽加lmL,洗1min。
    (3)每槽加入洗涤液0.5mL,再加所提供的酶标抗体10uL,混匀后置37%孵育30rain。
    (4)同上洗涤后,加入显色剂A0.5mL+显色剂B0.5mL,作用5~10min。
    (5)待阳性带显色清晰,即加终止液0.5mL,2min后弃去液体,用自来水洗涤后取出薄膜,待干后即可判断结果。
 
    4.结果判断  将薄膜上显色带与阳性标准带对照即可判断出阳性自身抗体。如:①显色区带是29kD、28kD、13.5kD为抗Sm抗体;②显色区带是73kD、32kD、17.5kD为
抗ulRNP抗体;③显色区带是52kD为抗SSA抗体;④显色区带是48kD、47kD、45kD为抗SSB抗体;⑤显色区带是86kD、70kD为抗Scl-70抗体;⑥显色区带是55kD为抗Jo-1抗体;⑦显色区带是38kD、16.5kD、15kD为抗Rib抗体。
 
    5.注意事项  ①判断结果时,应将薄膜记号线与标准带“0”线对齐;②不同批号的标
准带不可混用。
 
    6。临床意义  抗Sm是SLE的标志抗体且与狼疮性肾炎活动程度相关。抗ulRNP是MCTD的标志抗体,少见于SLE、PSS等;抗SS-A和抗SS-B是SS的标志抗体,少见于SLE、MCTD、PSS等;抗Scl-70是PSS的标志抗体;抗Jo—1是PM/DM的标志抗体;抗Rib是SLE的标志抗体,少见于PSS等。