高灵敏度的ELISA(HS-ELISA)或酶联免疫荧光测量法(ELFIA)
Shalev等用碱性磷酸酶(AP)标记的
抗体作用于具有潜在荧光的底物4-甲基伞形酮磷酸盐，反应后生成高强度的荧光物质——4-甲基伞形酮，可用荧光仪测量。
与AP的传统显色底物(P-NP)比较，新底物使ELISA的检测极限提高了16～39倍，最小检出值可达10-15mol／L，即渺克(ag=10-18g)水平。除AP外，目前用于荧光测定的标记酶还有β，半乳糖苷酶(β-G)和HRP。三种酶及其相应底物和应用效果见表。
ELISA应用的酶和荧光底物表
酶 底 物 产 物 激发光(nm) 发射光(nm) 相应的信号
AP MUP MU 360 450 10
β-G MUG MU 360 450 10
HRP HPA 二聚体 317 414 0.03
注：MUP(4-甲基伞形酮磷酸盐)MU(4-Ep基伞形酮) MUG(4-1~基伞形酮…p…D—半乳糖苷)四A(羟基丙酸)
Kitamura等将ELFIA法进一步改进，用于定量测定人IL-2，采用双抗体夹心法，并结合使用生物素化抗体和p—半乳糖苷酶标记链霉亲合素，以MUG为底物，敏感性比常规ELISA法提高约100倍，可测出IL-2的最低水平为0．3pR／mL。
