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酶联免疫斑点(ELISPOT)
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- 酶联免疫斑点 ( enzyme-linked immunosorbent spot, ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。
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- 淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养中被培养液中含有的特异性抗原或刺激剂激活后，将这些细胞转入ELISPOT培养板中。这些活化的淋巴细胞所分泌的细胞因子，在孵育的过程中可在分泌细胞原位被ELISPOT培养板上包被的特异性细胞因子抗体所捕获。
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- 将细胞和过量的细胞因子洗除后，加入生物素标记的检测抗体，孵育后洗去多余检测抗体。然后加入酶标记的链亲和素（二抗），孵育后洗去多余酶标链亲和素（二抗）。最后加入酶的底物，作用后可形成不溶的颜色产物即斑点（SPOT）。每个斑点是激活的淋巴细胞分泌的细胞因子区域，代表一个活性淋巴细胞。
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- 实验结果可在显微镜下观察或使用酶联免疫斑点自动图象分析仪（BioReader 4000 Pro-X）来进行计数分析。该方法可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应能力及记数特异性抗原刺激下分泌性淋巴细胞产生的情况。
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- ELISPOT比ELISA灵敏度高102～103倍。ELISPOT不仅能分析细胞因子分泌的总量变化，更能独特检测活化淋巴细胞的数量变化。ELISPOT可精确到检测出一百万个淋巴细胞中的一个活化细胞的细胞因子分泌。
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- 理论上讲，所有能分泌细胞因子的细胞都可以用ELISPOT进行检测分析。实际应用中常见的检测细胞类型包括：外周血淋巴细胞（PBMC）、骨髓、或者中枢神经系统和淋巴组织的单细胞悬液。
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- ELISPOT是一个崭新的技术平台，它适用于多种免疫学研究的精确分析。对于疫苗研究，中国药品生物制品检定所在《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》及《预防用以病毒为载体的活疫苗制剂的技术指标原则》等规定中均指出，ELISPOT是检测和评价疫苗的细胞免疫的有效方法。
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