此法是Serf于1985年建立。在反应系统中，AP并不直接催化底物显色，而是使底物NADP+(辅酶Ⅱ)脱磷酸，生成NAD+(辅酶1)。NAD+活化第二酶系统——醇脱氢酶和黄递酶(diaphoras)催化的氧化还原循环(redoxcy cycle)，NAD+还原为NADH，乙醇被氧化成乙醛。

 

    NADH还原四氮唑盐生成深蓝色的可溶性甲谮(入_max二492nm)。此反应系统具有较强的放大效应，对AP信号的放大比一般KLISA至少强250倍。

 

    Johannsson等将上述反应系统引入双抗体夹心ELISA法，用于检测促甲状腺激素(TSH)，敏感性可达pU／L，即每孔(100rtl)约2．8X104个TSH分子。

 

    据Seth等研究认为，此种新型ELISA在敏感性、特异性、测定速度及简便程度等诸方面均优于放射免疫测定。反应的最终产物甲腊的最大吸收波长(492nm)又在现有酶标仪的读数范围，检测时无需增添新设备。

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