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免疫荧光组织化学染色方法--直接法
这是最简便、快速的方法，用已知特异性抗体与荧光素结合，制成特异性荧光 抗体，直接用于细胞或组织抗原的检查。此法特异性高，其缺点是一种荧光抗体只能检查一种抗原，敏感性较差，原理见图。
但此法非常实用，应用也广泛，例如肾穿刺IgA、IgM、IgG、C3c、Clq和HBsAg的检测，其效果要优于免疫酶标，还用于转基因的示踪蛋白、病原体等的检测。可用于石蜡切片、冰冻切片和细胞涂片等的检测。其操作流程如下。
[标本] 肾穿刺标本冰冻切片，厚5um；或石蜡切片，厚2um。
[试剂]
①荧光标记抗体：兔抗人IgG-FITC、兔抗人IgA-FITC、兔抗人IgM-FITC，工作浓度均为1：30。
②0．01mol／L(pH7．4)PBS。
③缓冲甘油：1份0．1mol／L(pH8．0) 磷酸缓冲液(PB)与9份甘油混匀。
[染色步骤]
①肾穿刺标本冰冻切片室温下用丙酮固定10min，再以PBS洗3X 3min，石蜡切片58℃烤4h，常规脱蜡至水，0．4％胃蛋白酶消化1h，或0．1％胰蛋白酶消化30min，PBS洗3X3min。
②置切片于湿盒内，分别滴加兔抗人IgG-FITC、兔抗人IgA-FITC、兔抗人IgM-FITC，于37℃，30min。
③用PBS洗切片3X3min。
④缓冲甘油封片。
⑤荧光显微镜下观察结果。
[结果] 肾小球特异性荧光染色呈翠绿色。
[对照染色] 正常兔荧光血清染色：如上法处理切片，结果应为阴性。
[染色抑制试验](一步法) 将荧光抗体和未标记的抗体球蛋白或血清(相同)等量混合，如上法处理已知阳性抗原的切片。结果应为阴性。为证明此种染色抑制不是由于荧光抗体被稀释所致，可用盐水代替未标记抗血清，染色结果应为阳性。此法结果较二步法稳定。
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