PCR在生物学上的应用
 
(一)产生大量已克隆化双链DNA中的特定序列
    利用载体上互补的寡核苷酸引物,克隆载体上的目的DNA片段。在一系列相互嵌套、渐进排列的引物引导下,进行一组PCR,可以除去目的DNA两侧多余的序列,也可在扩增的引物末端引入一些附加的核苷酸,如限制酶酶切位点,也可以生成一些缺失突变体。
 
(二)以少量mRNA生成cDNA文库
    以mRNA为模板,以OligodT为引物,在逆转录酶的作用下,合成eDNA第一链,然后再通过PCR扩增该链,生成大量的双链DNA。也可以酌情在引物的5’端加上限制酶酶切位点,以利于将扩增所得的双链DNA克隆到适当载体中。
 
(三)选择性扩增特定DNA序列
    已知某一目的蛋白质的氨基酸的部分序列就可以设计两套特定的寡核苷酸引物,从cDNA第一链库中扩增目的序列。
 
(四)生成大量单链DNA进行序列测定
    常规PCR后,反应后的DNA产物进行脱盐处理,除去过剩的dNTP,通过互补于DNA扩增产物中某一适当区段的p32标记寡核苷酸作引物,便可对DNA扩增产物进行序列测定。另外通过特殊的PCR方法,即不对称PCR也可扩增出单链PCR。
 
(五)构建突变体和重组体
    利用引物设计上的一些变化,通过几次PCR反应,可以构建出基因的突变体和重组体,以便于研究基因的一些性质。
 
    此外,还可以进行酵母菌落分析、检查酵母内的遗传操作、小载体PCR和单一位点PCR用于捕获克隆在YAC中的基因组DNA末端序列,也用于分离与克隆的DNA或已知的DNA序列紧邻的DNA。
 
 

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