琼脂扩散试验诊断马传染性贫血病
（一）材料与试剂
1．精制琼脂粉
2．打孔器、加样器、平皿
3．标准阳性血清和标准阴性血清，由指定的生物制品厂购买。
4．马传染性贫血病琼脂扩散用抗原，由指定的生物制品厂购买。
5．pH7.4PBS液
（二）操作方法
1．取琼脂粉1g，加含有1/万硫柳汞的PBS液100ml，水浴加热使之完全融化。
2．取平皿（直径9cm），将融化的琼脂倒入，每个平皿倒入15ml～18ml，使其厚度约为2.5mm，冷却后加盖，放入4℃～8℃冰箱内，至少4h。
3．按7孔梅花图案打孔，中央孔一个，孔径4mm，外周孔6个，直径6mm，孔距8mm（中间孔至外周孔的中心距离），封底。
4．中央孔加抗原，2、5号孔加标准阳性血清，其余1、3、4、6孔分别加被检血清，加满为止。加毕后，平皿加盖，平放入铺有数层湿纱布的带盖搪瓷盘内，置15℃～30℃条件下孵育。每日观察一次，连续3天。
（三）结果判定
当标准阳性血清孔与抗原之间出现一条明显致密的沉淀线时，再进行被检血清孔的判定。
阳性：被检血清孔与抗原孔之间形成一条沉淀线，或者标准阳性血清的沉淀线末端向内弯向毗邻的被检血清孔。
阴性：被检血清孔与抗原孔之间无沉淀线，且标准血清阳性孔与抗原孔之间的沉淀线直向毗邻的被检血清孔。
可疑：标准阳性血清孔与
抗原孔之间的沉淀线末端似乎弯向毗邻被检血清孔，但不易判断。此种结果判为可疑。可疑结果必须进行复试，将抗原做2
×，4
×，6
×，8
×等倍数稀释，进行琼脂扩散，观察时间可延长至5d，最后判定结果。
