催化信号放大法(CSA法)的基本步骤
 
    CSA标记方法包括以下基本步骤。
 
    (1)特异性一抗经免疫亲和或核酸杂交与靶目标结合,随后用HRP
标记二抗或用链霉亲和素—HRP进行检测。
 
    (2)标记酪胺酸盐衍生物被HRP大量激活。最常用的是荧光或生物素的酪胺酰胺衍生物,用其他半抗原交联的酪胺或用聚合物标记的酪胺酰胺,包括交联金颗粒的酪胺酰胺。
 
    (3)在HRP—目标物相互作用部位的邻近区域,产生的高反应、短寿命的酪胺酰胺原子团(radical)与残基(主要是蛋白质酪胺酸残基的酚半族)共价结合。
 
    (4)在直接CSA法中,荧光信号可直接被检测,产生很好的空间分辨率和很强的信号强度。当使用半抗原标记的酪胺酰胺时,如生物素—XX酪胺酰胺、可逆的DSB-X生物素酪胺酰胺或DNP-X酪胺酰胺,随后的步骤需要识别上述半抗原的生物交联剂。第二检测步骤包括荧光染料标记的半抗原识别剂,如链霉亲和素荧光结合物。
 
    HRP沉积的生物素酪胺酰胺还可进行化学发光检测。纳米金1.4nm金簇的链霉亲和素交联物也可用于在光镜和电子显微镜下显示生物素酪胺酰胺交联物。
 
    每一个过氧化物酶标记的多个酪胺酰胺底物的周转带来的信号放大,即产生了明显的实用效果,称为低丰度目标物的超敏检测。可应用于FISH、免疫组织化学、流式细胞仪和神经解剖学示踪,尤其可用胶体金转化,使免疫电镜的检测更敏感,其阳性检测率明显升高。