抗体的稀释度包括特异性抗体，中间抗体及标记抗体。任何一种免疫组化方法要想得到令人满意的染色效果，必须将抗体进行最佳稀释。一般来说，抗体的稀释度取决于下列因素。
(一)抗体的浓度(亦称滴度)
每毫升溶液内所含抗体分子越多，滴度就越高，该抗体可高度稀释，尤其是特异性一抗的稀释度。一般商品化抗体只知道每毫升含多少抗体蛋白量，不知道所含抗体分子。自己制备抗体可通过琼脂糖双扩散或放射免疫法进行测定。商品化抗体一般告知大约的稀释度，例如用PAP法可1：100～1：200稀释。但往往购买到一种新抗体后，需要利用组织切片进行最佳稀释度的测定。
(二)稀释度的测定方法
在测定抗体最佳稀释度时，可将阳性强度与背景染色以“+”形式来表达，“+ + + +”为极强阳性，“+ + +”为强阳性，“+ +”为弱强阳性，“+”为弱阳性，“一”为阴性。
1．直接测定法
按表2—4稀释抗体，4℃过夜，观察分析结果。从表2—4的结果中可知，400为最佳稀释度，因其特异性染色强，且背景低。
表2-4 抗体稀释度的直接测定法
一抗稀释度 特异性染色强度 非特异性 一抗稀释度 特异性染色强度 非特异性
l： 50 + + + + + + l：400 + + + (一)
1：100 + + + + + + 1：500 + + (一)
1：200 + + + + + 阴性对照 (一) (一)
1：300 + + +
2．棋盘稀释测定法
按表2—5稀释、测定，从表中显示的结果可知，一抗1：100、二抗1：200为最佳稀释度。
表2-5 抗体稀释度的棋盘稀释测定法
第二抗体 一抗稀释度
1 ： 50 l：100 1：200 1：400
1：100 + + + +(+ +) + + + +(+ +) + + +(一) +(一)
1：200 + + + +(土) +++(一) + +(一) +(一)
1：400 + +(一) +(一) (一) (一)
注：括号内为背景染色
(三)抗体的配制
抗体的配制及使用是开展免疫组织化学工作的一个重要环节，其检测的结果既要可靠，又要能重复，这就要求实验人员在配制抗体过程中要注意其精确度。目前，随着抗体稀释液的稳定性提高，一次稀释抗体可用一年。当然，还可以购买到商品化即用型一抗，使用非常方便。
(四)抗体稀释液的种类
可根据需要选择不同的抗体稀释液。如稀释当天用完的一抗，用0．05m01／L(pH7.6)TBS即可。如需长期保存，可用如下稀释液：取0．1g明胶(或绿色明胶)溶在100ml0.05m01／L(pH7．6)TBS缓冲液中，边搅拌边加热至60℃，待完全溶解后，冷却至室温，加入1g牛血清白蛋白，最后加入200mg aN3，分装保存在一40℃中备用。另外，抗体原液应分装后一40℃保存，可保存5年以上。
