抗子宫内膜抗体(endomethal antibody，EMAb)检测
子宫内膜抗体(endomethal antibody，EMAb)是子宫内膜异位病患者受到异位内膜的刺激，或经血逆流等因素导致免疫应答紊乱产生的一种自身抗体，并与子宫内膜中靶抗原结合，在补体参与下，引起子宫内膜免疫病理损伤，影响孕卵着床，也容易发生早期流产。目前检测EMAb的方法有间接免疫荧光法(1FT)、双向免疫扩散法(1D)、间接血凝法(PHA)及ELISA法等。IFF法需刮取子宫内膜制备抗原片，并需一定设备，不易普及开展，ID及PHA法的灵敏度与特异性均不高，现介绍间接ELISA法。
1．试剂 ①子宫内膜抗原：从子宫切除术取得的子宫内剖取内膜，用无菌生理盐水洗去血块，剪成lmm3小块，悬入0．01mol／L，pH7．4PBS中(内含青霉素1 000U／mL，庆大霉素50ug／mL，链霉素100ug／mL，10％小牛血清)与0．25％胶原酶(collagenase Type 1)共育，通过250um,40um不锈钢分样筛，洗去胶原酶，收集筛网上子宫内膜腺体，经玻璃匀浆器匀浆后，1 000r／min离心20rain，弃沉淀，上清通过抗人全血清-Sepharose 4B柱，收集流洗液。浓缩后，双向免疫扩散与抗人全血清、抗人纤维蛋白原抗体之间应无沉淀线，作为包被抗原；②HRP标记的SPA结合物，用方阵法滴定最适工作浓度。
2．操作步骤 在聚苯乙烯反应板每孔加100uL子宫内膜抗原(1：100)，4T：，包被过夜，常法洗涤。用含15％小牛血清的pH7．40．01mol／LPBS封闭，45℃温育1h，洗涤后加1：2稀释的待测血清，45℃1h后洗涤，加底物(OPD-H202)溶液，于37％避光反应5～15min，加H2S04终止反应后，测492nm波长吸光度(A)值。以A值的X十2S为正常上限，大于或等于上限者为阳性。
3．临床意义 正常妇女由于经血逆流人腹腔对免疫系统的刺激，血清中有低水平EMAb存在(阳性率3％—7％)，以中年妇女的阳性率最高，闭经后EMAb水平下降，渐趋消失。不孕、流产及子宫内膜异位症患者阳性率可达37％～50％。EMAb、抗精子抗体和弓形体感染是引起人类不孕、流产的3个主要因素，联合检测则更可以提高诊断的准确性。
