抗乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor，AchR) 抗体检测
重症肌无力(myastheniagravis，MG)是一种神经肌肉系统疾病，由于病人的自身抗体与神经肌肉连接处的乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor，AchR)结合，对此受体起封闭和破坏作用。由于此种受体的大量破坏，从而发生神经的冲动不能传导至肌肉，其主要临床表现为肢体软弱无力。抗AchR抗体主要为IgC型(以IgCl、IGC．2亚类为主，IgC．亚类次之)，可检测到IgM型。不同类型的MG病人血清抗AchR抗体具有不同性质。抗AchR抗体的检测方法最先使用的是放射免疫，以后，为避免使用核素，各种酶联免疫法应运而生。这些检测方法中都要应用。·银环蛇毒素(a-bungarotoxin，a-BT)：a-BT是从银环蛇毒液中提取的一种肽类，分子量为8kD左右。它能高度选择性与AchR结合，这种结合几乎是不可逆的。如用ELISA法，可用ct-BT预先包被固相载体，然后利用其特异性吸附加入的AchR，再测定待测血清中的抗AchR抗体。ELISA法简便易行，便于推广，故将其介绍如下。
1．试剂 ①a-BT：可购得商品；②AchR：取人骨骼肌200—250g，用生理盐水洗净，加入湿重2倍量的缓冲液，高速匀浆90s后20 000Xg离心30rain。除去上清(血液、脂质)，加入湿重2倍量的缓冲液，再次匀浆。向其中加入TritonX-100至最终浓度为2％，4℃搅拌过夜。100 000Xg离心1h，上清即为AchR。也可购买商品；③HRP标记的抗人IgC。
2．操作步骤
(1)用包被液将ct-BT稀释为最适浓度(用方阵滴定法选出)，包被聚苯乙烯反应板，每孔200pL(含ct-BT约为2．5pmol／L)。4℃过夜后用洗涤液洗3次，每次3min(以下同)。
(2)将AchR用稀释液适当稀释，加至包被孔中，每孔200btL(0．2pm01)，37~C1h。同上洗涤。
(3)力[1X适当稀释的待测血清，每孔200gL，37℃30min。同上洗涤。
(4)加入最适工作浓度的HRP标记抗人IgC，37℃30rain。同上洗涤。
(5)加入底物溶液(OPD-H202)每孔200L，37℃ 30min，mol／LH2S04终止反应。
3．结果观察 于酶标仪上测492nm吸光度。以阳性混合血清作为标准血清，制备标准曲线。待测血清中抗AchR抗体含量，可根据吸光度从标准曲线上换算。
4．正常范围与临床意义 须对正常人和相关疾病患者进行调查，确定正常上限。抗AchR抗体是MG的主要自身抗体，总的阳性率在63％、90％之间。抗体滴度基本上与病情严重程度相关。有效治疗后该抗体水平下降，临床恶化时又可见该抗体滴度上升。抗AchR抗体的阳性检出率除与前述的抗原有关外，还与肌无力的临床类型、人种和是否伴发其他自身免疫病等因素有关。我国人口中的MG总抗体水平较低，但在降低阳性标准后，其阳性率与欧美国家相近。然而，有部分MG患者血清中测不到抗AchR抗体。因此，抗AchR抗体阴性不能否定MG的诊断。应当指出，抗AchR抗体阳性还可见于胆汁性肝硬化、癫痫、强直性肌营养不良、DOWN病等。
