【生物技术】聚乙二醇(PEG)沉淀补体消耗试验

聚乙二醇(PEG)沉淀补体消耗试验

用低浓度PEG将IC沉淀，沉淀物中加入补体，以溶血反应检测补体消耗率。

(一)试剂

1．热聚合人ISC：制备方法同PEG沉淀试验。

2．硼酸缓冲盐水(朋S) 含硼酸0．1mol/L，硼砂25mmol/L，NaCl 75mmol/L，调整为pH8.4

3．PEG 用BBS将PEG配成12.5%和2.5%。

4．0.2mol/L EDTA-Na2用1mol/L NaOH调整为pH7．2。

5．5XVB保存液 NaCl 85，0g，巴比妥5．75g，巴比妥钠3．75g，加蒸馏水约1 500ral，加热溶解后补加蒸馏水至2000mL。

6．GVB²⁺5×VB保存液400mL，0．03mol/LCaCl210mL，0．1mol/L MgCl₂ 10mL，2％明胶lOOmL，补加蒸馏水至2000mL，pH7．5。

7．致敏绵羊红细胞(SRBC) 2％SRBC悬液加等量1：1 000溶血素，37t水浴l0min，用GVB²⁺将致敏SRBC配成1．5×108/mL。

8．人补体与健康人对照血清选用总补体溶血活性正常的健康人血清数份混合，作为补体来源。自3名健康人各取血清50mL，各按lmLl份分装，—70℃冻存，每次取3份血清作为对照。

(二)操作步骤

1．待测血清0．3mL，加0．2mol/L EDTA-Na₂和BBS各50uL，充分混匀后加入12。5％PEG 0．1mL，混匀，置4℃ 90rain。

2．4℃ 1 700r／rain离心10min，弃上清，沉淀物用2．5％PEG洗1次，用玻璃棒搅拌，再于4℃ 1 700r/min离心15min，弃上清，管口余水用滤纸吸除。

3．加入37℃ 30min预温的GV铲’30uL，待沉淀溶解后，加入混合人补体10uL(用微量加样器准确加入)。混匀，置37℃，使补体与IC充分反应。

4．加入1．5X108／mL致敏SRBCl．0mL，37℃水浴振荡60rain。取出后立即加人4℃冷生理盐水6．5mL，离心，吸取上清液于414mn波长测吸光度。

5．每批试验以热聚合人IgG 5、10、25、50、lOOug/mL制备标准曲线。

根据标准曲线换算成相当于热聚合人IgG的ug/mL。