火箭免疫电泳法测定补体C4、B因子
1．主要试剂
(1)羊抗人C4抗血清：按说明书所示单扩效价扩大2—4倍稀释，或分别用含不同浓度
抗体的琼脂糖凝胶浇板，选择峰高、清晰度适当的抗体浓度为最适工作浓度。
(2)羊抗人B因子抗血清：按说明书所示单扩效价扩大3—5倍稀释，也可按选择C4抗血清稀释浓度的方法确定最适工作浓度。
(3)电泳缓冲液：称取10．30g巴比妥钠，1．83g巴比妥，溶于1 000mL蒸馏水中。此液为pH8．6，离子强度0．05的巴比妥缓冲液。
(4)凝胶缓冲液：以定量测定时用1：4稀释的电泳缓冲液，B因子定量时1：5稀释。
(5)染色液：0．25％考马斯亮蓝，称取0．25g考马斯亮蓝R-250，溶于100mL脱色液中。
(6)脱色液：甲醇900mL、冰醋酸200mL、蒸馏水900mL。
2．操作步骤
(1)1％琼脂糖凝胶板的制备：称取0．50g琼脂糖和1z聚乙二醇(PEG 6 000)置100mL三角烧瓶中，加入50mL凝胶缓冲液，隔水煮沸至琼脂糖完全溶解，55℃保温；加入适量的抗C4血清或抗B因子血清(预先实验选定)混匀，浇板，凝胶厚度lmm。沿阴极端约2cm处打孔，孔间距6～8mm，孔径3—3．5mm。
(2)待测样本用凝胶缓冲液1：10稀释，参考血清对倍稀释(一般作5个稀释度)，每孔加5～IOul。
(3)将样本孔端接负极，电压12。5V／cra电泳5ho
(4)取出凝胶板，用生理盐水漂洗2次，去离子水漂洗1次。
(5)将干净滤纸铺在凝胶板上，干燥、常规染色、脱色。
(6)结果计算：量取各火箭峰的高度，根据峰高—浓度标准曲线计算待测样本中C4或Bf含量。
