1．原理

    兔红细胞不经致敏可激活人补体旁路途径，导致兔红细胞溶解。在反应系统中加入乙二醇双氨基四乙酸(ethyleneglyc。1bis-aminotetracetate，EGTA)可和血浆Ca²⁺螯合，EGTA与Mg²⁺结合能力很弱，故经典途径被封闭。根据兔红细胞的溶血程度，可测定补体旁路途径的总补体活性。

 

    2．所需主要试剂

   (1)兔红细胞(rabbitredbloodcell，RRBC)悬液的制备：无菌采兔耳静脉或心脏血，用阿氏液抗凝，分装，4℃保存。可用1周左右。试验时取一定量的RRBC，用EGTA—GVD2’应用缓冲液洗涤3次，并用该缓冲液配制成3X108个／mL细胞悬液。

    (2)0．1mol／LEGTA-M／’溶液：EGTA 38．00g，MgCh·6f1020。30g，NaOH约7．OOg，溶于蒸馏水中，以1mol／LNaOH调节至pH7．5，加蒸馏水至1 000mL。

    (3)0．03mol／LEGTA-GVB2’：0．1mol／LEGTA-M／’300ral，0．1mol／LCaCl2 5mL，巴比妥缓冲液(5X，NaCl 85g，巴比妥酸5．75g，巴比妥钠3．75g，蒸馏水1 500mL)180mL，2％明胶50mL，加蒸馏水至几，调节至pH7．5。

    (4)0．1mol／L乙二胺四乙酸三钠原液(EDTA-Na3)：EDTA-Na3 37．23g，NaOH 4．00g。分别将EDTA-Na3溶于500mL蒸馏水中，NaOH溶于100mL蒸馏水中，将NaOH溶液加入ED—TA-Na3溶液中混合，用1mol／LNaOH调节至pH7．5，加蒸馏水至1L。

    (5)0．01mol／LEGTA-GVB2’应用缓冲液：巴比妥缓冲液原液(5X)360mL，0．1mol／LEDTA-Na3原液200ral，2％明胶溶液lOOmL，蒸馏水加至2Lo

 

    3．方法

    在各试管中加人反应物，37℃水浴40min后，加入应用缓冲液6．3mL，3 000r／rain离心10rain，取上清，在分光光度计上读取OD452nm值，然后计算每毫升血清样本ACH50单位(方法同CH50测定)。·正常值为18．9±2．2(X±1 SD)U／ml。

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