抗补体试验检测与补体结合的CIC
血清中有免疫复合物存在时，可与其本身的C1(内源性C1)结合。将被检血清56℃加热1h，能破坏结合的C1，空出
补体结合位点。当加入豚鼠血清(外源性C1)及指示系统(致敏SRBC)时，CIC又可与外源性C1结合，使致敏SRBC的溶血被抑制。
(一)试剂
1．缓冲生理盐水 NaCll7．00g，NaaHP041．13g，KH2P040．27g，蒸馏水溶解至100mL。用时取此液5mL，加蒸馏水95mL，10％硫酸镁0．1mL当日使用。
2．溶血素 按效价以缓冲盐水稀释至2单位。
3．2％SRBC新鲜脱纤维羊血或Alsever液保存的羊血(4℃可保存3周)，用生理盐水洗2次，第三次用缓冲盐水，2 500r／min离心lOmin，取压积红细胞用缓冲盐水配成2％悬液。为使SRBC浓度标准化，可将2％悬液用缓冲盐水稀释25倍，于分光光度计(542nm)测定其透光率(以缓冲盐水校正透光率至100％)。每次实验所用SRBC浓度(透光率)必须一致，否则应予调整。
4．致敏SRBC 2％SRBC悬液加等量1：1 000溶血素，混匀，37℃水浴10rain。
5．豚鼠血清 取3只成年健康豚鼠血清混合分装，每管0．5mL，—30℃保存。用时取出一管，以缓冲盐水作1：100稀释。
6．热聚合人IgG 配制方法同PEG沉淀试验。
7．50％溶血标准管 致敏SRBC0．4mL加0．6mL蒸馏水使完全溶血后，取0．5mL加缓冲盐水0．5ml
(二)操作步骤
1．将被检血清置56~C水浴1h。
2．设两排管径、色泽相同的试管(试验排与对照排)，每排5支。
3，加豚鼠血清与缓冲盐水至各管。
4．试验管每管加被检血清0．1mL，对照各管不加血清，用缓冲盐水0．1mL代替。37℃水浴10rain。
5．各管加致敏SRBC 0．4mL，混匀，置37℃水浴30rain。
6．将各管1 000r／rain离心3min，或置4℃待SRBC自然下沉后观察结果。以上清液与50％溶血管比色。
(三)结果判断
以50％溶血管作为判定终点。凡试验排比对照排溶血活性低1管或1管以上者，抗补体试验阳性，提示有免疫复合物存在。每次实验可用热聚合人IgC作阳性对照。
(四)注意事项
1．此方法敏感性较高，可测出每毫升IC的限度为微克(Pg)，甚至纳克(ng)水平。其缺点是任何水平上千扰补体反应序列的物质都能引起假阳性结果。补体旁路途径的激活剂(如天然多糖、细菌内毒素等)将产生明显的抗补体活性，血清经过56℃加热，可能会改变某些IC的结构。因此，有人认为单独抗补体试验阳性，尚不足以证实IC的存在。
2．混合豚鼠血清一般1：100稀释后应用。—30℃保存2周后或在夏季取血，豚鼠补体活性会有所下降。使用前可先滴定，选取0．1mL可引起50％溶血的补体稀释度。
3．豚鼠血清切忌反复冻融，已融化未用完者宜弃去。
4．缓冲盐水、2％SRBC悬液、致敏SRBC均应新鲜配制。
5．被检血清应新鲜，无细菌污染及溶血。如当日不检测应置—30℃冻存。检测前置56℃水浴1h灭活，应严格控制加温温度与时间。
6．本法只能检出与补体结合的CIC，抗补体的任何因素均能干扰本试验。
