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免疫原的制备
- 用为免疫动物产生抗体的抗原物质如果是人工合成的。质地比较纯，免疫动物后可获得质量好的抗血清。如果以从组织中提取的物质作为抗原，必须经过纯化，保证提取物的纯净，才能获得质量好的抗血清。某些物质的分子量比较小，抗原性弱，属于半抗原，不易使动物产生抗体，必须把这些半抗原连接到大分子物质（载体）上，形成较为理想的免疫原，既能减少免疫注射的次数，又可节约抗原，产生良好的免疫效应，获得高质量的抗体。
- （一）载体
- 用为作为载体的物质较多，下列几类可供选择。
- 蛋白质类载体：人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）、兔血清白蛋白（RSA）、牛甲状腺球蛋白（TG）、血蓝蛋白（Hemocyanin）以及人、牛和鸡γ-球蛋白等均可作为载体。这些载体免疫活性较强，有商品供应，容易获得，即使自选提取，操作也较方便。常用 的有TG、BSA、HAS等，以TG为好。
- 多肽聚合物，人工合成的多聚赖氨酸 、多聚谷氨酸、多聚混合氨基酸等，可与半抗原结合，所形成的免疫原可获高滴度、高亲合度的抗血清。
- 大分子有机化合物和某些粉末，如聚乙烯吡咯酮、羧甲基纤维素、聚甲基丙酸酯微粒、乳胶和炭末等，可吸附半抗原，也可用来作为载体，但用这类载体合成的免疫原免疫动物，所获抗血清的质量不稳定。
- 载体，尤其是大分子物质本身就是一种抗原，它们进行体内，可发挥致敏作用，激活免疫系统，从而使半抗原也可以使机体产生优质的抗体。因此，如果把半抗原与无免疫原性的载体结合，就不能使机体产生抗体。另外，半抗原与载体结合后，可适当延迟其降解和排出体外，从而可以发挥更久的作用。
- （二）偶联剂
- 半抗原和载体联接，操作比较简单，在一般实验室中都可进行。但对反应条件有一定的要求：在反应过程中半抗原的免疫活性不发生改变，也不应引起载体变性到不溶解的程度。常用的方法是利用偶联剂把半抗原和载体联接起来。用作偶联剂的有碳化二亚胺类、戊二醛、二异氰酸化合物和二卤化二硝基苯等。这些偶联剂使半抗原与载体在-COOH、-NH2或-SH等基团部位发生结合。
- 碳化二亚胺偶联过程示意如下：
- 由反应过程可见，碳化二亚胺的偶联作用即可以在NH2部位发生，也可发生在羧基部位。
- 戊二醛所起的偶合作用与碳化二亚胺有所不同，戊二醛的两个醛基分别与载体和半抗原的-NH2结合。它起一种“桥梁”作用，而把载体与半抗原联接在一起，其反应过程为：
- 在免疫原的制备中，应根据不同的半抗原选用偶联剂。
- （三）制备过程
- 以制备催产素（OT）免疫原为例：
- （1）1mgOT，溶解于1ml 双蒸馏水或0.25%醋酸溶液中。10mgTG溶解于1ml 0.1mol/LPBS(pH7.5)或蒸馏水内。
- （2）把OT溶液与TG溶液振荡混匀。
- （3）边搅拌边滴加入0.25%戊二醛1ml。加毕后再搅拌5～10min，在室温下继续反应2～3h，就可供免疫动物用。
- 免疫原以新制备的为好，如果一次制备了较多的免疫原，也可保存在-40℃的低温冰箱内备用。
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