细胞因子DNA检测测定细胞因子基因
细胞因子是由细胞分泌的
蛋白质，在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增生与凋亡等重要生理活动，在抵抗外来病原体侵袭及维持机体内环境平衡中均起重要作用。如某种细胞因子的基因发生缺失或突变，可能导致该细胞因子表达减少或缺如，或无功能，甚至导致疾病的产生。此外，某些外界刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达，或表达减少，从而参与疾病的发病及病理过程。故细胞因子基因的检测，在临床上受到重视，本节介绍一些常用的检测细胞因子DNA与RNA方法的原理及操作原则。
主要用于检测细胞因子的基因有无缺失、放大、突变及某些细胞因子的多态性分析。常用的方法有Southern印迹杂交，斑点印迹杂交，PCR，原位杂交及原位PCR等。
(一)Southem印迹杂交
本法是将基因组DNA经限制性核酸内切酶酶切，再经琼脂糖凝胶电泳将酶切后的DNA片段按分子量大小分离，然后将含DNA片段的琼脂糖凝胶变性，并将DNA转移到硝酸纤维膜或尼龙膜等固相支持物上，用针对某一细胞因子的核酸探针来测定该细胞因子的特定DNA序列结构。
利用Southern印迹杂交可进行基因组基因的定性及定量、基因突变分析及限制性片段长度多态性分析(RFLP)等。
(二)斑点及狭缝印迹杂交
将DNA变性后直接点样于硝酸纤维膜上，可用手工操作点样，也可用斑点式或狭缝式点样器点样，再进行杂交，前者杂交信号为圆点，后者杂交信号为带形。本法可用于基因组中特定基因及其表达产物的定性及半定量分析。由于其操作比Southem与Northem印迹简单、迅速，所需样品量少，且可在同一张膜上同时进行多个样品的检测，故很适合于临床应用。但其缺点是不能鉴定所测基因的分子量，而且特异‘陛不高，有一定比例的假阳性。
(三)聚合酶链反应(PCR)
PCR可用于检测待测细胞因子基因有无缺失及突变，如有缺失，则缺少扩增的DNA片段；如检测突变，因突变引起产生新的或消除原有的内切酶位点，可将扩增片段作RFLP分析(PCR／RFLP)，或用PCR结合序列特异寡核苷酸探针(PCR／SSO)斑点杂交进行分析，即针对各种基因突变合成一系列正常和突变序列的寡核苷酸片段，标记后，与PCR扩增产物进行杂交，如严格控制杂交及洗膜条件，可使探针与待测DNA序列间1个碱基错配就不能杂交上；此外，还可应用PCR结合序列特异引物(PCR／SSP)及上述两种方法检测某些细胞因子的多态性。
(四)原位杂交及原位PCR
1．原位杂交 其基本原理是标记含互补序列的DNA或RNA片段(即探针)，在适宜条件下与细胞内或染色体上特定的DNA形成稳定的杂交体。根据探针的标记物是否能直接被检测，将原位杂交分为直接法与间接法。前者的杂交体不经免疫组织化学即可直接显示；而后者探针的标记物多是半抗原，故其杂交体需通过免疫组织化学方法间接显示。此法可用于细胞因子基因的组织细胞及染色体定位。
2．原位PCR 原位杂交的应用受其敏感性的影响，而且细胞因子的基因均为单拷贝，有时不能被检出。原位PCR就是将PCR扩增所必需的各种成分，通过细胞膜或核膜进入胞内或核内，以固定的DNA或RNA为模板，在原位进行扩增。而扩增产物因分子较大，或互相交织，不易透过细胞膜而保留在原位。再应用原位杂交技术将其检出。
原位PCR及原位杂交可用于检测基因突变、基因重排及染色体易位等，并可同时观察疾病中特异性DNA序列改变发生在何种组织及细胞之中，能揭示细胞中的异常基因及其表达出现在细胞增殖的哪个时期，而该细胞又有何形态学变化，这为探讨该基因变化与疾病的关系提供了有关的信息。
