血小板衍生生长因子(plateletderivedgrowthfactor，PDGF)能刺激成纤维细胞、神经胶质细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞的分裂增殖，以及诱导成纤维细胞、血管平滑肌细胞、单核细胞和中性粒细胞趋化。人皮肤成纤维细胞AGl523可作为检测PDGF诱导细胞株增殖活性的靶细胞。

 

    1．用含10％FCS的MEM培养液培养AGl523细胞，于检测前用0．25％胰蛋白酶消化生长的细胞。每个35mm培养皿中加入3X104细胞／2mL，置37~C，5％C02条件下培养养2d，洗去培养液。

 

    2．加入系列稀释的待测样品、0．1mg／mL人血清白蛋白、0．02uCi(740Bq)3H-TdR和无血清的MCDBl05培养液，总体积为lmL，继续培养48h。

 

    3．吸去上清液，用3～4mL 5％三氯醋酸(TCA)溶液固定细胞10min，吸去TCA并洗涤，室温自然干燥。

 

    4．加入0．5mL含1％SDS的0．3mol／LNaOH溶解细胞15min，将溶解物转移到液体闪烁管中，加5mL闪烁液，通过p-计数仪计数cpm。约3ng／mL(0．1mmol／L)PDGF可诱导50％最大3H-TdR的摄人。

 

    BALB／c 3T3细胞可作为检测PDGF促增殖作用的靶细胞，在96孔细胞培养板中进行。可采用’H-TdR掺入法或MTF法等测定增殖细胞数。但其他细胞因子对3T3细胞也有促增殖作用，可用相应的中和抗体作阻断试验。

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