白介素7IL-7)的检测
 
    IL-7主要由骨髓基质细胞产生,对B前体细胞的增殖及T细胞的发育有刺激作用。由于IL-7来源局限,主要为骨髓基质细胞及IXN/A6细胞系,因此,现多采用基因工程技术,从转染含IL-7eDNA表达质粒的哺乳类细胞培养上清中获取。
    (一)依赖细胞株增殖法
    IL-7的依赖细胞株为Clone-K和“N/2bx,具体步骤参照IL-2检测。
    (二)B前体细胞短期培养增殖法
    1.取小鼠骨髓,制成单细胞悬液,经两次贴壁去除粘附细胞,将悬浮细胞离心后再重悬于1—2mL含5%FCS的IMDM培养液中。
    2.将细胞通过SephadexG-10柱(0.5—1X 5~10em),室温静置10rain,以去除残余的粘附性或基质细胞;用培养液洗脱收集的细胞即为B前体细胞,洗涤后调整细胞浓度为2.5X105/mL。
    3.将待测样品在96孔培养板内依次稀释,每孔lOOgL,每个稀释度设3复孔,并设阴性对照及阳性对照;然后每孔加入100~LB前体细胞,5%C02,37℃培养48h,终止培养前4~8h每孔加入0.5uCi3H-TdR/20uL。
    4.收集细胞测定cpm值。
(三)活化的胸腺细胞增殖法
    IL-7可促进ConA活化的胸腺细胞增殖,用以检测重组IL-7的生物活性。由于IL-1、IL-2、IL-4对活化的胸腺细胞也有促增殖作用,故用此方法检测混合培养上清标本时应用相应的中和抗体作阻断试验。
    1.制备BALB/C小鼠胸腺细胞悬液,用含0.5~5ug/mLConA的完全DMEM培养液调整细胞浓度为1×107mL。
    2.于96孔培养板中每孔加入100uL胸腺细胞悬液,分别加入IL-7检测样品和一系列稀释的IL-7标准品,每个样品设3复孔。
    3.37C,5%C02温箱培养48h,采用3H-TdR掺入法或比色法测定细胞增殖反应,并计算IL-7活性单位。
    4.注意事项:实验前应先选择一个单独使用促增殖作用最低,但与IL-7一起使用有最大增殖作用的ConA浓度。
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