D10G4.1细胞增殖法测定slL-1的生物活性
D10G4．1细胞是小鼠T辅助细胞克隆，依赖于IL-1和饲养细胞生长的细胞系。D10G4．1细胞增殖法优于胸腺细胞增殖法，因其对IL-1的敏感性大大增加，而对IL-2相对不敏感。对IL-1的敏感度比对IL-2大100—1 000倍。
(1)用RPMI-1640完全培养液将D10C,4．1细胞配成2X105／mL，分加至96孔板各孔中，100uL／孔。
(2)将IL-1样品以不同的稀释度加人孔中，50uL／孔，一式3份。
(3)加入50uL／孔亚适剂量的CoM，5％~02，37T；温箱中培养48h。
(4) 3H-TdR 0．5uCi／10uL／孔，继续培养18—20h。以下步骤同胸腺细胞增殖法。
(5)注意事项
1)D10C,4．1细胞每周可分裂2～3倍，一般每隔3-4d换人含大鼠IL-2(1L-2为D10G4．1细胞长期生长所必需)、卵白蛋白(100／1g／mL)的条件培养液，每隔7d换一次饲养细胞。
2)饲养细胞的制备：①取C3WHeJ或其他H-2K小鼠脾细胞，制成单细胞悬液。用低渗溶液破坏红细胞；②1 000r／rain离心10rain洗涤细胞，悬于含丝裂霉素C(50Pg／mL)的PBS中，370(2作用1h，使细胞失去增殖能力；③用PBS洗涤细胞4次以去除丝裂霉素C，然后将细胞加到D10G4．1细胞培养液中，使其终浓度为5X105～10X105细胞／mL。
3)使用D10G4．1细胞检测IL-1时，至少在8d前加入饲养细胞，前3d给予IL-2。
3．LBRM-33-lA5细胞生物特性转变测定法 一些小鼠T细胞系仅在有IL-1存在的条件下产生一定量的IL-2，并且IL-2的产生量与IL-1的浓度成直线关系。本法就是利用IL1可使LBRM-33—lA5细胞由IL-2非产生株转变为IL-2产生株的原理而设计的。该方法较小鼠胸腺细胞测定法更敏感，其敏感度可提高100—1 000倍。
(1)用含丝裂霉素C(50弘e／mL)的RPMI-1640培养液调整LBRM-33—lA5细胞浓度为5X106／mL，作用1h。
(2)用RPMI-1640培养液离心1 000r／min，10rain，洗涤细胞4次，以去除丝裂霉素C。
(3)将LBRM-33-lA5细胞重悬于培养液中，使其浓度为5×105／mL，分别加入96孔培养板中100pL／孔，然后加入IL-1样品和亚适剂量的PHA各50uL／孔。
(4)用RPMI—1640培养液离心洗涤CTLL-2细胞，去除生长培养液，调整细胞浓度为8×104／mL，加至含LBBM-33—lA5细胞的培养板中，50／uL／孔，培养20h。
(5)加
3H-TdR0．5／uCi／50ul/孔，4h后收集细胞测定。
