细胞表面IL-2R(mlL-2R)的测定
白介素2受体(interleukin 2 receptor，IL-2R)由。、p两条链组成。单独的IL-2Ra为低亲和力受体，单独的IL-2即为中等亲和力受体，而双链的IL-2Rop则具有高亲和力。Hut-102细胞可自发释放大量可溶性IL-2R(slL-2R)，这些受体的检测对免疫学研究和某些疾病发病机理的探讨均有重要意义。
1．125I-rlL-2放射受体分析
(1)rlL-2的标记：常用的核素为125I，可使用氯胺T氧化法、乳过氧化物酶标记法和Iodogen标记法等。
(2)lzsI_IL_2与受体的结合：待测细胞[106／(100ul·管))经洗涤后加入不同浓度的125I-IL-2(5 000～50000dpm／管)，对照管加入100倍量的未标记IL-2，总反应体积为200uL，37~C孵育20min后立即置冰浴，加入含0．3％BSA预冷的Hanks液终止结合。
(3)离心分层法分离结合(B)及游离(F) 125I-IL-2：用0．3％BSA-Hanks液200~zL，稀释细胞沉淀，然后小心加到预先装有200／uL1mol／L蔗糖液(或85甲c硅油与15％石蜡油混合物)的Eppendoff塑料离心管中，10 000r／min离心2min，吸去上清及蔗糖层，丁计数仪测定cpm值。
(4)计算：TB二总结合，为不加未标记IL-2所测得的结合值；NB：非特异性结合，为加入100倍量未标记IL-2后的结合值；SB二特异性结合，为TB与NB之差；特异性结合率(％)=[(TB—NB)/TB]×100％；非特异性结合率(％)=(NB)／(TB)X100％；F=游离125I-IL-2浓度。
然后再计算B／F，按受体结合理论的经典方法Scatchard作图，求出最大结合容量(Bmax)和平衡常数(Kd值)。
2．125I抗IL-2RMcAb放射免疫分析 该法主要用于检测IL-2Ra的数量，其操作步骤除用1251-抗IL-2RMeAb(或任何一株抗IL-2RaMoAb)替代125I-IL-2外，与125I-IL-2放射受体分析法完全相同。受体与标记抗体的结合受多种因素影响，如反应环境的pH值、温度、反应细胞的数量及孵育时间等。选用37~C、20min为标准反应温度和反应时间(pH7．4)，细胞浓度为每反应管0．5x105—1x105／200ul。经与人外周血淋巴细胞孵育后绘制125I抗IL-2RMcAb与细胞膜表面结合的饱和分析曲线。
3．免疫荧光法检测IL-2Ra+细胞比例
为测定某一细胞群体中IL-2Ra+细胞的比例多采用免疫荧光技术，借助流式细胞仪(例如FACS)或荧光显微镜即可分辨出IL-2Ra+或IL-2Ra-细胞。
(1)抗体的选择：第一抗体可用任意一株抗IL-2RaMoAb，例如测定人源细胞时多选用抗Tac(Tac即为IL-2Ra链)，第二抗体可选用FITC标记的羊(或兔)抗鼠IgG。
(2)免疫荧光法测定：将5X105—10X105待测细胞(如PHA刺激的人T淋巴细胞)与人Ig共孵育15min以去除抗体Pc段的非特异性结合(此步可省略)，然后将细胞悬浮于100t~LPBS中，加入如S／1001~L抗Tac抗体，4~C孵育30-60rain。细胞用冷PBS洗涤2～3次，加入适量稀释的羊或兔抗鼠IsC-FITC结合物，4~C孵育30rain，细胞洗涤后可直接进行FACS测定，或用0．7％的多聚甲醛固定，滴片后荧光显微镜下观察。
