小鼠胸腺细胞增殖法测定slL-1的生物活性
其原理是IL-1可协同有丝分裂原(ConA或PI-lA)刺激T细胞或胸腺细胞发生增殖反应。同时IL-1可刺激T细胞产生细胞因子(如IL-2)。此法是目前测定IL-1最常用而简便的方法，其敏感度为10—50pg／mL。但缺乏特异性，因为IL-2同样可以协同有丝分裂原刺激胸腺细胞增殖，并且在细胞的增殖过程中可受样品中T细胞增殖抑制因子的干扰。
(1)拉颈处死小鼠(6—8周龄)，取胸腺置含RPMI-1640完全培养液的平皿中。
(2)将胸腺剪碎(或毛玻璃磨碎)，无菌纱布过滤，制成单个细胞悬液。
(3)1 500r／min，10min，离心洗涤细胞2次，然后悬于含5％NBS的RPMI-1640完全培养液中，使细胞浓度为1．5X107／mL。
(4)ConA(或PHA)亚适剂量的确定：测定样本前必须作ConA剂量曲线，观察其对胸腺细胞增殖的影响。选择ConA的亚适剂量，即能够激活胸腺细胞，但又不引起明显增殖的剂量，操作步骤如下：
①在96孔培养板中，每孔加100uLConA，终浓度分别为0．5 ug/mL，如1ug/mL，2 ug/mL，5 ug/mL，10 ug/mL，各设三个复孔，以不加ConA的培养液作对照；
②各孔加100~L胸腺细胞，37℃，5％C02温育72h，收获前12h加0．5uCi的3H-TdR 50uL／孔；
③用微量细胞收集仪收集细胞于玻璃纤维滤纸上，用b液闪计数仪测定3H-TdR掺人量；
④数据(cpm)以三个复孔的平均值±标准差表示，据此选择ConA作用的亚适剂量，通常为0．2-2。0ug／mL。
(5)将含IL-1的待测样品上清倍比稀释加到96孔板中，每孔0．1mL，一式3份，设阴性对照、培养液对照及有丝分裂原对照，并设置不同稀释度标准晶IL-1对照。
(6)将ConA(0．2-2．0 ug/mL)或PHA(0．5～4 ug/mL)混入细胞悬液中，分别加至96孔板中，0．1ml/孔。
(7)5％C02，37℃；温箱中孵育72h，收集前10～12h加3H-TdR 0．5uzCi/孔。
(8)收集细胞于玻璃纤维滤纸上，测定’H-TdR掺人量。
