单个细胞产生细胞因子测定法
为了确定细胞因子的产生细胞，需在单个细胞培养条件下进行测定。常用的方法有反向溶血空斑试验(reversehemolytic plaqueassay，RH-PA)和反向ELISA斑点试验。
(1)反向溶血空斑试验(RHPA)：RHPA是一种体外检测抗体分泌细胞的试验。其测定细胞因子分泌细胞的原理是将待测分泌细胞因子的细胞置于经SPA包被的单层SRBC中，抗细胞因子抗体被SPA固定在SRBC表面并与待测细胞所分泌的细胞因子结合：在补体存在时，细胞因子和抗体的复合物激活补体，溶解附近的红细胞形成溶血空斑。空斑的大小与细胞分泌细胞因子的量成正比。本试验亦可用免疫化学方法染色溶血空斑中心的细胞以确定分泌细胞因子的细胞的类型：
(2)酶联免疫斑点试验(ELISPOT)：ELISPOT的原理是先将抗细胞因子抗体包被固相载体，再加入不同来源的细胞，待细胞分泌细胞因子后洗去细胞，然后加入相应的酶标抗细胞因子的抗体，即可通过与底物显色反应的深浅测定结合在固相载体上的细胞因子量，并可在光镜下观察分泌细胞因子的细胞。如用蛋白质或肽激活T细胞，则可测定分泌细胞因子的抗原特异性T细胞。在试验体系中，所用的包被抗体与酶标抗体应分别针对细胞因子的不同抗原决定簇。亦可将细胞因子分泌到可结合蛋白质的膜上，用免疫化学的方法测定结合到蛋白质膜上的细胞因子。
