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细胞因子受体检测的基本技术
 
    1.活细胞吸收试验  将过量的待测细胞与限量细胞因子(配基)共孵育,若细胞膜表面存在相应的受体即可吸收配基,通过测定回收后配基生物活性的丧失情况可确定受体是否存在。此法简便,适用于定性,但不适用于定量检测。
    2.核素标记重组配基的放射受体分析
    这是确定细胞受体分布及其特性的主要方法,可测定受体的数量及亲和力。一般采用:①重组细胞因子体外标记核素;②利用cDNA转录获得足够量的细胞因子mRNA,注入非洲爪蟾卵母细胞内,在体外翻译的底物中加入核素标记的氨基酸(如35S-Met或3H-Leu等)。通过生物合成内标记产生的重组细胞因子的功能不受影响,因此适用于某些稳定性较差的细胞因子的检测。
    3.抗受体McAb法  利用McAb既可通过封闭受体抑制相应细胞因子的生物学活性进行受体检测,也可用标记的McAb直接作免疫放射受体分析或免疫沉淀。
    4.重组细胞因子与受体的交联分析
    利用化学交联剂将标记的重组细胞因子与膜受体交联,细胞裂解物经PAGE后进行放射自显影分析,通过带型分析可确定受体的分子量及亚单位。
    5.受体cDNA分析  分子克隆是在基因水平上研究细胞因子受体的最佳途径,通过核苷酸序列推导的氨基酸顺序进行结构功能区分析,是深入探讨受体作用机制的基础。受体cDNA片段可用来制作cDNA探针以研究受体基因的转录功能及表达调控。此外还可利用基因工程技术生产重组受体分子。目前已有10多种细胞因子受体的基因被克隆出来,包括IL-1R,IL-2Ra,IL-2即,IL-3R,IL-4R,IL-6R,IL-7R,INF/R,MPOR,M-CSFR等。
    6.可溶性细胞因子受体的检测  某些细胞因子受体除存在于细胞膜外,尚可分泌进入体液,称为可溶性细胞因子受体(solublecytokinereceptor),如slL-2R,slL-4R和slFN-yR。这类受体多采用免疫学方法检测。下面以IL-2R为例介绍细胞因子受体的检测方法,这些方法也适用于其他细胞因子受体的检测。
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