白介素IL-1的诱生
 
    产生IL-1的细胞种类很多,其中最主要的为单核-巨噬细胞。通过cDNA克隆表明:IL-1可分为IDl。(也称酸性ILl,Pi=5.0)和IL-1b(中性IL-1,pI=7.0)。两者的分子量和生物活性相似,只能用抗体检测方法才能区别,常用的生物学测定法对两者都适用。IDl的生物学活性广泛,其检测方法亦较多。
    体外试验可用LPS等有丝分裂原诱导单核-巨噬细胞产生IL-1,或用P388DI(鼠)THP-1(人)细胞株制备IL-1。
    1.小鼠巨噬细胞IL-1制备
    (1)取6—10周龄BALB/c或C57BL/6小鼠,雌雄均可,拉颈处死后用酒精消毒。    (2)用带9号针头的5mL注射器腹腔注入5mL冷的含5%小牛血清的Hanks液(5%NBS-HBSS),轻揉腹部吸出腹腔液体(内含腹腔细胞),反复抽吸几次:
    (3)1 500r/rain离心8min,洗细胞2次。
    (4)将腹腔细胞用含10%小牛血清的1640液(10%NBS—1640)配成2x106/mL,加到24孔平底培养板,lmlJ孔,置5%C02,37cC温箱孵育2ho
    (5)每孔用5%NBS-HBSS洗3次,弃去未粘附细胞,贴壁细胞为巨噬细胞单层。
    (6)将LPS(10//z/mL)加入巨噬细胞单层,每孔lmL,培养4h;加入10%NBS-1640]mL继续培养至48h,收集上清液,置—20~C冰箱保存,待测IL-1活性及含量。
    2.从P388DI(鼠),THP-1(人)细胞获得IL-1。
    (1)常规传代P388D1和THU-细胞,制备P388D1和THP-1细胞单层。
    (2)用含2%—5%FCSRPMI-1640调整细胞浓度为1X106—2X106/mL。
    (3)培养24~48h后,离心后收集上清,滤过除菌,贮存在—20~C或—70~C待测。