Boyden盲端小室法检测IL-8趋化活性
Boyden法比琼脂糖法敏感，能检测出纳克(nz)水平的趋化因子活性，且需时间短、重复性好，现已被广泛采用。
Boyden小室由上、下两室组成，下室为一盲端，两室间用一层硝酸纤维素膜分隔。当下室加入IL-8或待测因子，上室加入细胞时，因子在膜的两侧很快形成浓度梯度，细胞从上室低浓度处向着下室膜移动，根据迁移细胞的多少和细胞类型判断趋化活性的强弱及性质。
(1)外周血粒细胞或单核细胞的制备：取肝素抗凝血5—10mL，经Ficoll—泛影葡胺密度梯度离心分离，得到单个核细胞、粒细胞和红细胞沉淀，将粒细胞、红细胞沉淀用低渗氯化铵处理溶解红细胞，即得到粒细胞。
(2)用含5％NCS的DMEM培养液洗
细胞2次，调整细胞浓度至2×10
6／mL备用。
(3)趋化试验：在Boyden小室的下室分别加入阳性对照，阴性对照及待测因子样品，每个浓度三个小室。
(4)盖上硝酸纤维素膜，注意下室液体和硝酸纤维素膜之间不应有气泡，上室、下室液体之间不应互相流通。
(5)盖上上室，每一上室加入200／uL细胞悬液，注意加样时应轻放加样器，以防损坏硝酸纤维素膜。
(6)置37℃，5％C02条件下孵育2h，孵育过程不应移动小室，以防破坏梯度。
(7)去除上室细胞，将膜取出，甲醇短时固定，苏木精染色，封片镜检。
(8)计算移动指数：高倍镜下计数每张膜下细胞数，按下式求出移动指数
移动指数=实验组细胞数／阴性对照组细胞数
(9)如所加细胞为?昆合细胞，可用另一种改进Boyden室，其上下室的容积分别为1．5mL，因此可将进入下室的细胞收集在试管中，分别进行荧光抗体染色，4~C，30min。然后加人第二抗体4~C，30min。详细方法见IL-4检测。
(10)流式细胞仪分析细胞表型，观察检测样本所趋化的细胞类型。
根据所加细胞不同，选择不同孔径的硝酸纤维素膜，粒细胞为3um孔径膜，淋巴细胞为8／um孔径膜。
