IL—10的检测
IL-10由辅助性T细胞亚群THl和TH2，单核细胞、巨噬细胞、B细胞和角质细胞(keratinocyte)产生。其生物活性广泛，可选择性地抑制单核一巨噬细胞的某些功能，对T细胞、B细胞等的功能亦有明显影响。现已获得重组的鼠和人IL-10及其特异性McAb。B细胞等在正常状态下可分泌一定量的IL-10，用LIS刺激可使其产量明显增加，诱生高峰在孵育18h后。
用IL-10McAb包被反应板，以生物素结合的第二抗体进行夹心法ELISA检测IL-10活性或含量。
(二)生物活性测定法
可根据IL-10对抗原刺激THl细胞产生IFN-7的抑制作用测定其活性。若不能维持培养Tul细胞，可用PHA刺激的脾细胞代替。
1．向96孔培养板每孔加50／zLRPMI-1640和50ul待测标本，并设置IL-10标准品(40ne／mL)对照，每一标本及对照组均设置3个复孔。
2．混匀后，自H排每孔取50gL加入G排，混匀后，自G排每孔取501~L加入F排，如此类推直至B排，A排作为阴性对照。
3．以2 500rad~C。照射鼠脾细胞，洗涤并计数，用RPMI-1640调整细胞浓度至2X107／mL。
4．用RPMI-1640洗THl细胞，用含抗原的培养液(终浓度为0．04％鸡红细胞)调整细胞浓度至2X106／mL。
5．将步骤(3)和(4)所得脾细胞和T细胞等体积混合，如可能存在IL-2、IL-4或TGF-b时，加相应MeAb对照(抗IL-4 5弘g／mL；抗IL-2 2ng／mL；抗TGF-p10ng／mL)。
6．每孔加501aLT细胞、脾细胞、抗原混合液，37~C C02温箱中培养24h。
7．从每孔中取上清50／uL(注意勿吸出细胞)，测上清的IFN-r，绘制标准曲线，并计算IL-10浓度。
