白介素5（IL-5）的检测
1．依赖细胞株增殖法 IL-5依赖株有CHl2、B13、T88-M和BCLl细胞，其培养条件和操作步骤与用CTLL-2细胞3H-TdR掺人法检测IL-2类似，推荐细胞浓度和加3H-TdR前后的培养时间见表。
各种IL-5依赖细胞株检测ID5的参考实验条件
细胞株 细胞浓度 加3H-TdR前培养时间 加3H．TdR后培养时间
CHl2 5×l103／mL 48h 6h
B13 5×104／mL 36h 12h
T88-M 5×105／mL 24h 12h
BCL1 5×105／mL 72h 6h
2．DXS共刺激B细胞增殖法
(1)常规制作B细胞悬液(同IL-4检测)，使其浓度为1X106／mL，并加入10ug／mL硫酸葡聚糖(dextransulfate，DXS)。
(2)取细胞悬液100uL加入已含有IL-5待测上清的96孔板中，37℃，5％C02温箱中培养60—72h。
(3)每孔加入0。5tu／20uL 3H-TdR，继续培养6—8h，收集细胞后，p—液闪仪测定cpm值。IL-5含量的确定，同依赖株检测IL-3。
3．LPS共刺激B细胞分泌IgA
(1)同上制备B细胞，调整细胞浓度至1X106／mL，并加入20Vz／mLLPS。
(2)取上述
细胞悬液100ktL加入已含有IL-5待测上清的96孔板中，37℃，5％C02温箱内培养4—5d后，取无细胞上清100uL，用ELISA法检测其中IgA含量。
4．嗜酸性粒细胞集落刺激法 操作步骤基本同前述“集落形成法”测IL-3活性。
5．过氧化氢酶检测法 IL-5刺激嗜酸性粒细胞增殖时，嗜酸性粒细胞合成并释放过氧化氢酶也随之增加。因此，测定培养上清中过氧化氢酶的含量可反映IL-5的活性。
(1)常规制作骨髓细胞，用10％NBS-IMDM调整细胞浓度至5X106／mL。
(2)取细胞悬液100uL加入含有IL-5待测上清的96孔板中，37℃，5％C02温箱中培养48h。
(3)取100uL上清，加入100ul过氧化物酶试剂，室温作用30min，加入50uL 4m01／LH2S04终止液，于492nm测OD值。
[附]过氧化物酶试剂贮存液：①0．05mol／LTris-HCl缓冲液pH8．0；②10％三硝基甲苯X-100(4℃贮存)；③20mg／mL0-邻苯二胺(OPD)(避光)；④30％U202(4℃)。
过氧化物酶试剂应用液(临用前配制)：①50mL 0．05mol／LTris-HCl缓冲液；②0．5mL10％三硝基甲苯X-100；③0．5mL20mg／mLOPD；④6uL 30％U202。
