IL—11的T10细胞检测法检测
IL-11是由骨髓基质细胞产生的一种细胞因子，具有促进多系造血，增强T细胞、单核细胞依赖的B细胞抗体的生成，刺激肝细胞表达急性时相蛋白，诱导神经组织分化等功能。目前已获样重组人IL-11(rhlL-11)。
本法是基于IL-11可促进T10细胞的生长。因IL-6也有轻微的促T10细胞生长功能，在标本中可能含IL-6时，应用针对IL-6的中和抗体封闭后再测定。
1．向96孔培养板中每孔加RPMI-1640100／~L，A排1—3孔不加。
2．稀释IL-11标准品成50U／mL，按如下稀释加样：A排1—3孔加入1501uL，转移50／xL加入B排1—3孔，混匀；自B排1—3孔转移50／xL至C排1～3孔，如此依次进行至G排。H排1～3孔留作对照。
3．A排第4～6孑L、7—9孑L、10—12孑L各力口——种待测样本，E排4—6孔、7—9孔、10—12孔加另三种样本，同上法从A—D、E—H进行系列稀释。
以上为3倍系列稀释，也可根据需要调整稀释倍数，使IL-11最低浓度为0．1～10U／L。
4。收获T10细胞，室温1 500r／rain离心5min，洗2次。
5．用5mL完全RPMI-1640培养液重新悬浮
细胞，计数活细胞数，调整细胞浓度至7．5X104／mi．。
6．向上述培养板中每孔加细胞悬液100／uL，培养3d，加3H-TdR，以下步骤同IL-2测定。
[附)T10细胞的维持培养：T10细胞是IL-6依赖性小鼠浆细胞瘤细胞系T1165在IL-“选择下分化而来，其长期培养方法如下：①细胞自液氮中取出解冻后，用RPMI-164010mL悬浮，1 500r／min离心10rain，洗去DMSO；②用5mL培养液稀释细胞，计数活细胞，用完全RPMI-1640培养液调整细胞浓度为105／mL，接种培养瓶；③加1 000U／mL的IL-110．2mL于培养瓶，培养3、4山④收获细胞，同上离心后，取5X105个活细胞接种于培养瓶，加培养液至10mL，同上加IL-11，培养传代。并注意观察培养细胞，若活细胞数<70％，降低细胞浓度至2X10
4／ml.
