淋巴母细胞增殖法检测IL—12
本法利用IL-12促进PHA激活的人淋巴母细胞增殖来测定IL-12含量，这是目前定量测定IL-12最好的方法，操作亦较简单，但因IL-2、IL-4和IL-7亦可促进PHA激活的淋巴母细胞增殖，故此法不宜用于可能含多种细胞因子标本的测定。
1．用完全培养液稀释人或鼠IL-12标准品分别至2ng／mL和4nz／mL，然后进行5倍系列稀释共3个稀释度。
2．系列稀释待检标本，使其IL-12浓度大致处于2—20ng／mL范围。
3．向96孔板加PHA激活的人淋巴母细胞50uL／孔(终浓度2X104／mL)。
4．加40ul待检标本和各稀释度IL-12标准品，设3个复孔，最后3孔加完全培养液50ul作为对照(无II．-12)，培养24h。
5．加3H-TdR，继续培养18h，收获细胞，计算IL-12含量。
①取正常供者外周血，常规方法分离PBMC；
②在5mL完全培养液中悬浮PBMC，台盼蓝染色计数活细胞；
③接种于75cm2培养瓶，20mL液体中的细胞数为1X107，加20／uL PHA混匀后，水平培养3d；
④加20mL培养液，摇动培养瓶使细胞?昆匀，转移20mL内容物至另一培养瓶；
⑤加人rh-IL-2至终浓度为50U／mL，孵育24h；
⑥将细胞从培养瓶转移至15mL离心管，室温下1 500r／min，离心5min，除去上清；
⑦用培养液同上离心洗3次，所得细胞即为淋巴母细胞。
