抗体捕捉生物测定法检测IL—12
IL-12由B细胞产生，由分子量分别为35kD和40kD两个亚基通过二硫键连接而成，其功能为诱导T细胞、NK细胞产生IFN-7；增强T
细胞、NK细胞的细胞毒作用，促进激活的T细胞、NK细胞增殖。
利用鼠抗人IL-12McAb(可自Roche公司购得)测IL-12浓度。
1．用包被缓冲液(pH9．5的碳酸钠缓冲液)稀释包被抗体为15ug／mL，在96孔酶标反应板，每孔加100rtl，室温包被过夜。
2．洗涤后加封闭液(含1％BSA的磷酸盐缓冲液)每孑L 2001uL，37℃1h。
3．在试管中稀释IL-12标准品为1ng／mL，然后作5倍系列稀释至8pe／mL(3管)。
4．待测样品用完全培养液作5倍系列稀释3—5个稀释度。
5．酶标板洗涤后，分别加各稀释度Ibl2标准品及待检标本，每孔100uL，每一标本设3复孔，加100~L完全培养液，室温孵育2．5—3ho
6．洗5次后，加PHA激活的人淋巴母细胞悬液(终浓度为2X104／mL)100uL／孔，C02温箱培养24h。
7．加3H-TdR，以下步骤同IL-2测定。根据标准曲线计算IL-12水平。
8．注意事项 应尽量使待测样品孔的3H-TdR掺人率位于标准曲线的陡峭部分，这样所得结果才准确。此外，由于IL-12分泌细胞中有40kD多肽的过量表达，而40kD多肽无IL-12的生物活性，故并非所有的抗IL-12抗体均适用于本法。
