UT-7细胞增殖法测定干细胞因子
 
    干细胞因子(stem cellfactor,SCF)是一种造血生长因子,其受体由原癌基因C-kit编码,故又称SCF为C-kit配基(C-kitligand)。SCF是原始骨髓细胞和胸腺细胞的强力促生长因子。
    UT-7细胞是人类原巨核细胞白血病细胞系,该细胞依赖于GM-CSF、IL-3或红细胞生成素(EPO)成活。人或鼠SCF可促进其增殖,据此,可用3H-TdR掺人量测定其活性。
    1.先用完全RPMI-1640将人或鼠SCF标准品稀释至50ng/mL,再行倍比稀释直至lng/mL。稀释过程可在96孔培养板上进行。
    2.待测标本用完全RPMI-1640倍比稀释,向96孑L板各孔中分别加入100uL/孔标准品或样本,每个稀释度加3孔,并加3孔RPMI-1640液作为对照以测定背景细胞增殖,留3孔加200uLRPMI-1640作无细胞对照。
    3.除无
细胞的对照孔外,其余每孔加100uL15×10
4/mL的UT-7细胞,培养72h,或直到最高浓度rSCF标准品孔细胞融合为止。
4.同IL-2测定法加3H-TdR,收集细胞测定cpm值。
5.3H-TdR掺人值(cpm)对SCF浓度(ng/mL)绘制标准曲线,根据cpm值在标准曲线上查知待测样本的SCF浓度。本法敏感度为3—5ng/mL。