纤维母细胞增殖法测定鼠IFN效价
(1)扩增纤维母细胞L929：向培养瓶(75cm2)中接种1X106细胞，加25mL完全DMEM，37％5％C02温箱中培养2～3do
(2)收获细胞，调整细胞浓度为2X106／mL。
(3)96孔板中每孔加DMEM 50PL，标本1、2、3各50t~L分别加入A、B、C排的第三孔，最后一排的第三孔加50txL稀释后的鼠IFN标准晶(终浓度为100U／mL)。
(4)自第3孔至第12孔系列倍比稀释样本和标准品。
(5)每孔加50／uLL929细胞，轻轻摇动以保证细胞分散均匀，37％5％C02温箱培养过夜。
(6)用完全DMEM培养液将VSV稀释至适当的浓度(方法见后)。
(7)从每排第2孔始，每孔加100~L病毒，第1孔加培养液作
细胞对照。
(8)定期观察细胞，待第1孔(细胞对照)形成完整单层，第2孔(病毒对照)细胞全部破坏时，去除每孔上清，用100／uL冷HBSS震摇洗2次，以除去细胞碎片。
(9)倒去洗液后，每孔加100／~L 5％甲醛，室温固定10min。
(10)用自来水洗去甲醛，每孔加100PL 0．5％甲基紫溶液，室温染色10min后自来水冲洗，倒置于滤纸上使干燥。
(11)肉眼或分光光度计观察结果：
①肉眼观察：以与细胞对照孔相同的标本最高稀释孔作为终点，与标准品对照确定其IFN活性单位。也可以50％为终点以提高测定敏感性，但判断和计算均较困难；
②分光光度计比色法测定：每孔加100uL无水甲醇，轻轻摇动溶解固定细胞上的染料。尽快测其在495nm处的吸光值，以50％为终点，通过与标准品的终点比较计算IFN活性单位。
