FACS分析检测跨膜型肿瘤坏死因子(TNF)
以下简单介绍用FACS分析检测跨膜型TNF。
1．材料
①含2％人血清，0．1％叠氮钠的PBS；
②FITC标记的TNF单克隆抗体；
③羊或兔抗TNF多克隆
抗体及F1TC标记的羊抗兔IzC。
2．操作步骤
(1)单核细胞加或不加激活剂，37℃培养一定时间。
(2)2000rpm离心10min，弃上清。
(3)用含2％人血清／0．1％叠氮钠的PBS悬浮细胞。
(4)将105细胞厅L0口人圆底96孔培养板，并加FITC标记的TNF单抗冰上放置20min。如无FITC标记的TNF单抗，可按(5)～(7)步骤操作。
(5)加1：500稀释的兔抗TNF多抗，冰上放置20min。
(6)用PBS洗一次，以去除未结合的抗体。
(7)再加1：500稀释的FITC标记的羊抗兔ISC，置冰上20min。
(8)PBS洗4次后，用流式细胞仪分析荧光标记阳性细胞百分率及平均荧光强度。
