胸腺细胞增殖法测定转化生长因子TGFβ
转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)可由机体的多种细胞分泌，因最初发现它能使正常成纤维细胞的表型发生转化，故名。实际上，TGF-β对多种细胞的功能均可发挥调节作用。
TGF-
β可抑制IL-1依赖性胸腺
细胞的增殖。其抑制程度与TGF-p的含量呈正相关。
1．在96孔板上，除开始2孔外，每孔加100uL完全RPMI-1640／HEPES培养液。
2．绘制TGF-β标准曲线在前4孔加20ng／mL的rTGF-β或纯天然TGF-β100uL，除最初2孔外，通过转移100uL上孔液至下孔对其进行系列倍比稀释，每孔的最终体积为100uL，每个稀释度设2孔，最后2孔的标准品浓度为0．005ng／mL。
3．将系列倍比稀释用酸或热激活的待测标本分别加入其他各孔，100txL／孔。
4．每孔加100U／mL rlL-1β10／1L。
5．将培养板置C02温箱中孵育，同时准备胸腺细胞悬液。
6．胸腺细胞悬液的制备方法同前述。每孔加50tzL细胞悬液(浓度为3×107／mL)。
7．加50uLPHA溶液(4ug／mL)，37~C培养72h，加3H-TdR继续培养4—5ho
8．收获细胞，测3H-TdR掺人率：以仅含胸腺细胞、rIL-1
β和PHA的对照孔为胸腺细胞的最大增殖率。在标准曲线上确定胸腺细胞的50％最大增殖率，通过产生50％抑制率的标本稀释度来计算待检标本中TGF-
β的浓度。
