MC9细胞增殖法测定干细胞因子
 
    MC/9细胞为小鼠肥大细胞系,对小鼠和大鼠的SCF刺激敏感;但对人的SCF不敏感,故可用于鼠SCF的测定。操作步骤同方法一。

    1.先用完全RPMI-1640将人或鼠SCF标准品稀释至50ng/mL,再行倍比稀释直至lng/mL。稀释过程可在96孔培养板上进行。

    2.待测标本用完全RPMI-1640倍比稀释,向96孔板各孔中分别加入100uL/孔标准品或样本,每个稀释度加3孔,并加3孔RPMI-1640液作为对照以测定背景细胞增殖,留3孔加200uL RPMI-1640作无细胞对照。
 
    3.除无细胞的对照孔外,其余每孔加100uL15×104/mL的MC/9细胞,培养72h,或直到最高浓度rSCF标准品孔细胞融合为止。
 
4.同IL-2测定法加3H-TdR,收集细胞测定cpm值。
 
5.3H-TdR掺人值(cpm)对SCF浓度(ng/mL)绘制标准曲线,根据cpm值在标准曲线上查知待测样本的SCF浓度。本法敏感度为3—5ng/mL。

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