表皮生长因子(EGF)的测定方法
 
    EGF主要来源于颁下腺。成年人许多组织中也表达EGF。人成纤维细胞、唾液腺癌细胞等也可产生EGF。EGF的作用没有种属特异性,人和小鼠的EGF对人成纤维细胞的作用相同。
 
    1.Swiss 3T3细胞增殖法
    (1)用含5%FCS的DMEM培养液将Swiss 3T3细胞调整成1×104/mL,接种于60mm的培养皿中(5mL),置37C 5%C02温箱中培养4~5d,待细胞汇合后,更换上述培养液,继续培养2~3d,此时细胞数不再增多。
    (2)分别加入200ral系列稀释的待测样品或标准品,阴性对照加培养液,继续培养4d。
    (3)采用3H-TdR掺人法或比色法测定细胞增殖反应。根据标准曲线计算待测样品中EGF的含量(活性),或用诱导50%最大细胞增殖的最高稀释度表达EGF的含量。
 
    2.BALB/c 3T3细胞增殖法
    (1)用含5%FCS的DMEM培养液将Swiss 3T3细胞调整成2×104/mL,接种于60mm的培养皿中(5mI),置37C 5%C02温箱中培养5ho更换同样培养液,继续培养24h。
    (2)向培养物中加入100~L系列稀释的待测样品或标准品,阴性对照培养皿加培养液,培养16h后,同上法测定和计算EGF的含量(活性)。
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