酶标记荧光(enzyme-labeledfluorescent)信号放大系统是另一种独特的免疫荧光信号放大技术。其原理是酶促反应(酶+底物)过程中在酶活性部位产生荧光沉积物，这样一个过程称为酶标荧光。目前可获得许多产生荧光和发光的酶底物，例如ELF-97磷酸盐、X—Gal、BCIP／NBT、坚固红、坚固蓝等。图3—11显示水溶性的ELF-97磷酸盐底物通过磷酸酶的作用，转为它的水解产物ELF-97乙醇。
这种高度不溶性的二维分子在磷酸酶活性部位形成一种强黄绿色荧光沉积物。与其他含有分子内氢键的结晶分子相同，ELF-97乙醇沉积物产生的荧光信号，不仅光稳定性相当好，而且还具有特别大的Stokes移位。其光稳定性比使用荧光黄交联物直接或间接检测得到的稳定性都好。这种高度光稳定性使得ELF-97乙醇标记的组织细胞在高倍镜下非常容易聚焦和拍照。
ELF-97磷酸酶底物是IHC、mRNA ISH以及在DNA芯片检测DNA的强有力工具。与常规方法产生的放射性信号不同，ELF—97mRNA检测信号可在几分钟内甚至几秒内生成，而且可很清楚地与样品的色素沉着分开。而且，在ISH应用时，ELF-97乙醇的黄绿色荧光沉积物产生的信号强度，比直接标记的荧光探针原位杂交或用IHC方法的二级抗体荧光放大方法产生的荧光信号强许多倍。
