肌红蛋白(myoglobin，Mb)的测定
肌红蛋白(myoglobin，Mb)广泛分布于心肌和骨骼肌中，占肌肉总蛋白的2％，位于胞浆中，正常人血中Mb含量很低，但当心肌和骨骼肌损伤时，血中Mb含量明显升高，因此，Mb的测定广泛用于急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction，AMl)的诊断、预后判断及病情测。Mb含量的测定方法较多，有RIA法、ELISA法、高效液相色谱法、滴金免疫测定法、速率散射浊度法、荧光免疫法和胶乳凝集试验等。有些试验如滴金免疫测定法，在数分钟内能得出结果，且有试剂盒供应，可在急诊室作及时检查，但是属于定性试验；进一步定量测定，可应用RIA法或ELISA法。前者已有试剂盒供应，但需要特殊设备，尚很少在医院中开展；后者要求设备简单，易于开展，同样可准确反映Mb的水平，现介绍
ELISA法如下。
1．试剂 ①纯化Mb：新鲜离体的心肌加2倍量蒸馏水后用组织匀浆器制成匀浆，离心除去碎屑，将心肌匀浆液以硫酸铵盐析得粗制Mb。然后在Mb粗提液中，按每150g心肌加100mg固体氰化钾，制备氰化Mb粗提液。将此粗提液通过SephadexC．-50凝胶柱，收集A410／A280~>4．2的洗脱蛋白峰，浓缩，透析得氰化Mb纯品，即纯化Mb；②纯化Mb多抗：用Mb抗原免疫动物，以双向琼脂扩散试验测抗血清效价，然后采用亲和层析法提纯Mb多抗。
2．操作步骤 用亲和层析纯的Mb多抗包被聚氯乙烯微孔板；在各孔中，先加100uL／孔的抗原稀释液(0．02mol／L，pH7．2 PBS含0．5％BSA)，然后再分别加入10gL Mb标准品(800、400、200、100、50、30、25、0nZ／mL)或待测血清标本，置37~C水浴90min。用洗涤液(含0。1％Tween-20的PBS)洗3次。加入HRP标记的抗Mb单抗，每孔100~tL；置37％水浴45min。洗4次，加新鲜配制的OPD-H202底物液，每孔100pL，37~C水浴15min，加2mol／LH2S0425pL／孔终止反应。在酶标仪上读取492nm波长的吸光度值。绘制标准曲线，算出待测血清Mb含量。
3．正常参考值 正常参考值上限：男性为55．40ng／mL，女性为50．67ng／mL，老年人为65．75ng／mL。有报告正常人血清Mb含量ELISA法为50～85ng／mL；mA法为印～85．g／mL。由于检测方法不同，测得Mb正常参考值不一样，各实验室应建立自己的正常参考值。
4．临床意义 Mb测定对AMI的早期诊断有一定价值。AMI发病后1～3h，血清Mb含量已升高；4、12h达峰值；发病后24h检测的阳性率明显高于谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的检测，可达正常值的7倍。且高峰期比AST、LDH早，甚至有1／3病人血清Mb升高早于心电图(ECG)梗塞0波的出现，故血清Mb可作为AMI早期诊断的指标之一。因其升高幅度与梗塞范围大小有关，因此血清Mb的检测对判断AMI预后有一定意义，用于判断AMI病人溶血栓治疗成功与否亦颇有价值。心绞痛患者血清Mb升高少见，且升高幅度小，故在鉴别心绞痛和AMI方面具有特异性的临床意义。
检测Mb含量诊断AMI也存在假阳性，主要出现在骨骼肌受损和肾衰时，但这些均可根据病史、临床表现及其他实验室检查项目的结果加以排除。此外还应注意由于采集标本较晚造成的假阴性。
