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抗眼肌抗体EMAb的检测方法
 
    抗眼肌抗体(eyemuscleantilody,EMAb)为一类能与眼肌细胞膜及可溶性抗原结合的自身抗体。杨清萍等(1998)在提取牛眼肌膜抗原的基础上,建立了检测EMAb的免疫印迹(WB)法,对自身免疫性甲状腺疾病及SLE患者进行了检测。现介绍WB法检测EMAB。
 
    1.操作步骤  将所提取的眼肌膜抗原多肽转印于硝酸纤维膜(NC膜,孔径0.3um)上,将NC膜置5%脱脂奶粉溶液内封闭过夜;含0.3%Tween 20,pH7.4的PBS洗涤;干后切条,4~C保存备用。作WB法时,将抗原膜条置反应槽中,加0.1mL兔血清,含0.3%Tween 20,pH7.4的0.01moL/LPBS 0.9mL和待测血清20~zL,37~C孵育45min,洗涤,每槽加辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgC lmL,37~C孵育45min,洗涤,加DAB底物液lmL,37~C20rain,加2mol/LH2S040.5mL终止反应2min后,流水冲洗,读取结果。
 
    2.临床意义  有突眼征和无突眼征的Graves病患者血清中EMAb检出率较高,但抗体阳性亦见于部分无甲状腺功能异常的突眼征患者,桥本甲状腺炎,SLE等患者中。SLE患者血清中存在的EMAb与自身免疫性甲状腺疾病患者的EMAb有所不同,主要针对42kD和35kD多肽,这种异质性抗体与抗核抗体无关,不能被ENA吸收,其存在意义尚不清楚,可能是SLE患者自身免疫反应的一种表现。
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