抗线粒体抗体AMA的检测方法
抗线粒体抗体(anti-mitochondrialantibody，AMA)是一种非器官特异性、非种属特异性的自身抗体。线粒体存在于全身各组织的细胞中，但以远曲肾小管最为丰富，故检查AMA所用的抗原基质多选用肾髓质。AMA检测目前仍主要用IFA，但近来也有采用RIA、ELISA和斑点免疫法等方法。下面以间接免疫荧光法为例检测AMA。
1．肾组织冰冻切片 将大鼠处死，剖腹取肾，在肾中部成楔形切下肾组织，立即冰冻。用冷冻切片机切成4—6um，贴于清洁玻片上，迅速用电风扇吹干，不固定。密封后置—20℃冰箱中保存。
2．操作步骤
(1)将待测血清用0．01mol／L，pH7．4PBSl：10稀释后滴加于底物片上，室温、湿盒反应30min。用PBS冲洗后再浸洗3次，分别为5min、5min、10rain(以下同)，吹干。每批试验设阳性、阴性对照。
(2)滴加最适浓度荧光抗体，室温、湿盒反应30min。同上法充分洗涤，吹干。
(3)用无自发荧光的缓冲甘油封片，荧光显微镜检查。AMA的特异荧光出现于富含线粒体的远曲肾小管上皮细胞的胞浆中。
3．注意事项 ①线粒体的稳定性差，极易自然破坏。因此，在制作切片时应注意将组织标本速冻，不能反复冻融，切片后要快速吹干，以防线粒体破坏；②切片保存是关键，放—20~C冰箱一定要防潮，从冰箱取出(特别是夏天)要注意防止水汽凝结，造成切片潮湿而破坏线粒体。取出切片后应立即放电风扇下吹干10min。
4．临床意义 原发性胆汁性肝硬化患者AMA阳性率可达90％以上，且抗体滴度甚高，半数以上病人可达1：200—1：6 000。胆总管阻塞性肝硬化、继发性胆汁性肝硬化患者，抗线粒体抗体皆为阴性。阻塞性肝硬化患者阳性率在3％以下，而慢性活动性肝炎阳性率为90％。正常人阳性率低于1％。据此，抗线粒体抗体的检查可作为原发性胆汁性肝硬化和肝外胆道阻塞性肝硬化症的鉴别诊断。另外，由于在慢性活动性肝炎时此抗体阳性率亦较高，故对鉴别诊断肝炎也有参考价值。
