抗心肌β1与M2受体自身抗体的检测方法
 
    近年来,学者们相继发现在扩张型心肌病(DCM)患者血清中存在抗心肌pI与M2受体的自身抗体。张麟等(1998)以心肌pl与M2受体细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原,用ELESA法首次检测了中国人DCM血清中抗心肌p1与M2受体的自身抗体,并分析其临床意义,现介绍如下。
 
    1.操作步骤  将心肌pI与M:两种受体的氨基酸肽段溶解于100mmol/L的无水Na2C03溶液中(PH:11),配成浓度为5//z/mL的抗原包被溶液。于微量酶标板每孔加50bL进行包被;4℃冰箱过夜,次日加50tze/mLPMT溶液封闭,37~C水浴1h,用PBS—T缓冲液洗板3次。将待检血清从1:20-1:2560倍比稀释,每孔分别加入血清50ul,4~C冰箱过夜,用PBS—T溶液洗孔三次。每孔加入50gLl:500亲和纯化的生物素标记羊记人IzC(H+L)抗体,37℃水浴1h。用PBS—T溶液洗板3次,每孔加人50/tLl:500的链霉亲合素一HRP结合物,37~C水浴1h,用PBS溶液洗孔3次。每孔加50~tL 2.5mmol/L H20:与2mmol/LABTS(溶于柠檬酸缓冲液,pH二5)的混合液,37~(2水浴30min后,用酶标仪以405nm波长测光密度值(OD值)。
 
    2.判断标准  以阳性血清与阴性血清的OD值之比即P/N≥2.1为阳性。以呈阳性的血清最高稀释度作为该标本的抗体滴度。每一样本均设双孔同时测定。
 
    3.临床意义  DCM患者不仅存在抗心肌p1与M:受体的自身抗体,而且抗体滴度也明显高于正常对照组。因此,在DCM患者中检测此类自身抗体对诊断和治疗有一定的临床意义,长期应用b-受体阻滞剂可能对病情的转归有利。
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