甲状腺过氧化物酶(thyroidperoxidase，TPO)是甲状腺微粒体(TM)的主要有效抗原活性成分，分子量为84～105kD，基因重组TPO为933个氨基酸的多肽链。鉴于以往使用的粗提TM抗原中混杂有其他抗原成分，在测定自身免疫性甲状腺炎病人血清中抗-TM时，可能出现少数假阳性，为使结果更为可靠，目前国外已将抗-TPO代替抗-TM抗体检测，而且大多数文献已将抗-TM抗体改名为抗-TPO抗体。我国徐荣桂等首先建立了纯化TPO抗原和测定抗-TPO抗体的ELISA方法。其TPO抗原分析与国外文献报告相似。抗-TPO抗体的阳性率在各组疾病中，与抗-TM抗体有一定相关性(r二0．731)，且低于抗-TM阳性率，与国外所得的结果也相近(r二0．584—0．835)。故介绍如下。

 

    1．TPO抗原的制备：取单纯性甲状腺肿手术切除物10g，冰冻后切成小块，加40mL0．05mol／L，pH 7．0PBS(含200btmol／LKl)。用组织捣碎机10000r／min破碎2min，再用超声细胞粉碎仪粉碎3rnin。其匀浆经纱布过滤。1 000r／rain离心10min，上清用35 000Xg离心45min(4℃)，沉淀物用上述PBS洗3次，将沉淀物再溶于2mLPBS中，然后加20mLl0％去氧胆酸钠和20mL 0．14~／,胰酶，室温作用1h，立即离心10 000 X g 20rain(4℃)，过SephadexG-200凝胶柱，同上PBS洗脱。收集主峰蛋白，PBS透析后再用抗人全血清Sevharose4B亲和层析柱吸收，—20cC保存备用。

 

    2．操作步骤  用TPO抗原5Ug／mL(用0．1mmol／LpH9．6碳酸盐缓冲液稀释)100gL包被聚苯乙烯反应板微孔，4℃过夜；洗涤后，加1：10稀释(用含10％小牛血清PBS)的病人血清100r&，同时设阴、阳性对照孔，45℃1h；洗板后加100tzLl：10 000HRP-SPA，45℃，1h；洗板4次后，用OPD底物显色10rain，以2mol／LU2S04终止反应；在酶标仪测492nm吸光度。阳性：P／N值大于或等于2．1。

 

    3．临床意义  甲亢和桥本甲状腺炎患者血清抗-TIAO的阳性率分别为42．2％和77．7％，与国内外文献报道接近。且类风湿性关节炎患者阳性率(3．1％)比国外的检测结果低。目前国内常用TGA及抗-TPO联合检测作为临床诊断和鉴别诊断自身免疫性甲状腺炎的重要依据。

---

【技术支持】抗核抗体（ANA）的检测方法	【技术支持】微量加样器（移液器）使用的一般原则
【技术支持】抗甲状腺球蛋白抗体（TGA）的检测方法	【技术支持】微量移液器的拆卸和安装的具体步骤
【技术支持】抗精子抗体（ASA）的检测方法	【技术支持】微量移液器的日常清洗和维护保养
【技术支持】抗卵巢抗体(AoAb)检测方法	【技术支持】微量移液器的实验室简单检测与校准
【技术支持】抗卵巢抗体透明带(ZP) 抗体检测方法	【技术支持】微量移液器的使用方法
【技术支持】抗平滑肌抗体（SMA）的检测方法	【技术支持】微量移液器的专业检测与校准
【技术支持】抗双链DNA（ds-DNA）抗体的检测方法	【技术支持】微量移液器是替代了玻璃吸管的计量仪器
【技术支持】抗体的鉴定通常是从亲和力和特异性方面着手	【技术支持】微量移液器头的类型与使用
【技术支持】抗体的稀释度稀释液及稀释度的测定方法	【技术支持】吸附法分离与纯化蛋白质
【技术支持】抗线粒体抗体（AMA）的检测方法	【技术支持】细胞化学染色的固定剂选择，切片处理与粘附
【技术支持】抗心肌β1与M2受体自身抗体的检测方法	【技术支持】纤维连接蛋白(fibronectin，Fn)的测定
【技术支持】抗心磷脂抗体（ACA）的检测方法	【技术支持】新型PCR分析方法毛细管PCR技术
【技术支持】抗眼肌抗体（EMAb）的检测方法	【技术支持】新型PCR分析方法荧光定量PCR技术
【技术支持】抗胰岛素抗体(AIAb)的检测	【技术支持】新型标记物对免疫测定技术发展的影响
【技术支持】抗胰岛细胞抗体(AICA)的检测	【技术支持】新型实时定量PCR仪
【技术支持】抗乙酰胆碱受体(AchR) 抗体检测方法	【技术支持】血清特种蛋白标志物酶联免疫测定的标准化