肝特异性脂蛋白LSP的检测方法
肝特异性脂蛋白(1iverspecificlipoprotein，LSP)为一种大分子的脂质相关复合物，含有大量肝细胞浆膜抗原，其中大部分是器官非特异性的，部分是肝特异性的。LSP抗原还存在种属非特异性的抗原决定簇。LSP的种属非特异性在人、兔之间，器官特异性在肝、肾之间更为接近。
因此在制备LSP抗原时，可用兔肝代替人肝；但在检测抗LSP抗体时，应考虑到肾病的相互干扰。由于LSP可能是活体内免疫病理反应的靶抗原，抗LSP可以通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)途径杀伤自身肝细胞，并认为此可能是导致体内肝细胞持续性损伤的主要因素。因此，近年来研究较多的是抗LSP的各种Ig类别。抗LSP抗体的检测有放射免疫沉淀法、放射免疫自显影法以及ELISA法等。现介绍
ELISA法。
1．试剂 ①LSP抗原：将新鲜正常人肝或兔肝除去包膜，剪成小块，用自来水，生理盐水洗去血液，直到肝组织颜色发白。称重，加等量(W／V)0．25mol／L蔗糖(EDTA-Tris缓冲液1 000mL，含蔗糖85．6g)溶液，于高速组织捣碎机中匀浆5min，3 000r／rain离心30min，除去沉淀。上清加硫酸铵使达50％饱和度，4cC静置1h后，3000r／min离心20rain，弃上清。沉淀溶于EDTA-Tris缓冲液，过SephadexC—100凝胶柱，用同一缓冲液洗脱，收集第一蛋白峰。加硫酸铵使达50％饱和度，4cC静置1h，3000r／min离心20min，收集沉淀溶于ED-TA-Tris缓冲液中，再过Sepharose 6B柱，同一缓冲液洗脱，收集第一蛋白峰，即为LSP；②酶结合物：HRP标记的羊抗人IgG、IgA、IgMF(ab’)：段。
2．操作步骤 在聚苯乙烯板孔中加入0．15mLLSP溶液(25ug／mL)，置37℃!h后，4~C过夜，洗3次，每次3min(以下同)；每孔加1：50稀释的待检血清0．1mL，置37~C1h，洗3次；加最适工作浓度的抗人IsC(或抗IzA、IgM)酶结合物0．1mL，37~C1h，洗3次；加底物溶液，37％20min显色后，用2mol／LH2S04终止反应。于酶标仪492nm波长测吸光度值。每板均设阳性、阴性对。
3．结果观察 P／N值≥1．1为阳性。P／N值计算法如下：
P/N=P/（Xn+2S）
P为待测血清吸光度值，Xn为50—100例正常对照血清的吸光度均值。
4．临床意义 抗LSP-IgG的检测也与肝炎病型的轻重有关，且滴度随病情变化而波动；进行动态观察，可以估计病情变化。抗LSP-IgM主要见于重症肝炎和急性肝炎，出现早，续时间短，似可做为肝细胞损伤的早期指标。抗LSP-IgA可能主要出现于自身免疫反应持续时间较长的病例，对于区别急性肝炎和慢性肝炎急性波动有一定的意义。在慢性肾病中，可出现一些交叉反应，应予鉴别。
