免疫球蛋白IgA的提取分离纯化技术
   (一)材料与试剂配制
    1.DEAE52纤维素
    2.0.10Mol/L ZnSO4液
    ZnSO4•7H2O 2.88g加水至1 000.00ml
    3.饱和硫酸铵溶液
    4.10%EDTA—Na
    5.SephadexG200
    6.0.01Mol/L pH7.4PB液
    7.0.10Mol/L pH6.4PB液
    8.血清
   (二)操作方法
    1.取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液,调pH至7.0,室温搅拌1h,离心去沉淀。
    2.于上清液中加入等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置30min或冰箱过夜。
    3.10 000r/min离心10min,去上清。
    4.取沉淀溶于4ml10%EDTA-Na溶液中。
    5.生理盐水中透析除盐。
    6.过DE52柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脱蛋白(IgG)弃去。
    7.换用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脱,收集蛋白峰,即为IgA。
    8.再过SephadexG200柱,洗液为0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl),收集洗脱液测OD280值,取第一峰即为纯化IgA。
    9.透析、浓缩、鉴定。
分泌型IgA的分离与鉴定
   (一)材料与试剂
    1.初乳
    2.SephadexG200
    3.0.10Mol/L pH6.8PB液
    4.0.01Mol/L pH7.4PB液
    5.DEAE52
   (二)操作方法
    1.取初乳20ml,10 000rpm离心10min,弃去表面脂肪层及底部的沉淀物。
    2.取乳清过SephadexG200柱(柱规格为2.50cm×90cm),以0.10Mol/L pH6.8PB液洗脱,第一峰为IgA(含IgG)。
    3. 收集乳液,于0.01Mol/L pH7.4PB液中透析。
    4. 将透析液浓缩至5mg/ml以上。
    5. 过DE52层析柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脱,洗下蛋白峰为IgG,弃去。
    6. 换用0.10Mol/L pH6.8PB液或0.01Mol/L pH7.4PBS(0.10Mol/L NaCl)液洗脱,
收集洗脱液 ,即为较纯的IgA液。
    7. 必要时,可再过一次SephadexG200柱。
    8. 浓缩,鉴定
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